細胞培養真菌污染定性熒光檢測試劑盒
細胞培養真菌污染定性熒光檢測試劑盒
細胞培養真菌污染定性熒光檢測試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
細胞培養真菌污染定性熒光檢測試劑盒是一種旨在通過特異性真菌細胞壁結合熒光染料使活體真菌立刻染色，呈現絲狀體狀藍色熒光的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種人體和動物細胞培養中真菌（霉菌）污染的定性檢測。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，檢測敏感，熒光清晰。
技術背景
細胞培養中的主要微生物污染包括支原體（mycoplasma）、細菌、真菌、酵母和病毒等。在含有抗生素的培養液中，低水平的真菌菌污染則難以觀察和發現。Fluorescence brightener 28，又稱為Calcofluor White M2R， 為一種特異性結合真菌細胞壁上纖維素（cellulose）和甲殼素（chitin），且紫外激發的藍色熒光染料，其分子式為C40H44N12O10S2，分子量916.98。一旦結合真菌細胞壁，呈現強力的藍色熒光。細胞培養真菌污染定性熒光染色技術，通過Fluorescence brightener 28對真菌菌胞壁的染色，具有快速檢測細胞培養中真菌的存在，在熒光顯微鏡下（激發波長365nm，散發波長425nm）下觀察到藍色絲狀體。
產品內容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
堿性液（Reagent C） 微升
產品說明書 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里，避免光照；堿性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
載玻片和蓋玻片：用于樣品染色的載體
臺式離心機：用于懸浮細胞操作
細胞培養板或培養皿：用于培養細胞的容器
熒光顯微鏡：用于觀察熒光染色情況
實驗步驟
一、 貼壁細胞培養檢測
1． 準備好待測細胞培養至50％鋪滿率
2． 小心移取5毫升細胞培養容器里的培養液到15毫升錐形離心管
3． 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為1000g
4． 小心抽掉上清液
5． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
6． 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為1000g
7． 小心抽掉上清液
8． 加入xx微升清理液（Reagent A），混勻
9． 移取20微升混勻液到潔凈的載玻片上
10． 放進37℃培養箱孵育10分鐘，使其晾干
11． 快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
12． 加上xx微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
13． 室溫下孵育5分鐘
14． 小心抽去清理液
15． 加上xx微升染色液（Reagent B）在載玻片上
16． （選擇步驟）加上xx微升堿性液（Reagent C）（注意：如果需要觀察真菌結構成分）
17． 蓋上蓋玻片
18． 在室溫下，暗室里孵育5分鐘
19． （選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
20． （選擇步驟）小心加上xx微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
21． （選擇步驟）小心抽去清理液
22． 封片處理
23． 置于熒光顯微鏡下觀察染色情況（100至400倍放大倍數）：激發波長365nm，散發波長425nm（類同DAPI濾波器）
真菌呈現絲狀體藍色熒光
二、懸浮細胞培養檢測
1． 將待測懸浮細胞（1 X 105總量）移入到15毫升錐形離心管
2． 放進臺式離心機離心15分鐘，速度為1000g
3． 小心抽去上清液
4． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
5． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
6． 小心抽去上清液
7． 加入xx微升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
8． 移取20微升混勻液到潔凈的載玻片上
9． 放進37℃培養箱孵育10分鐘，使其晾干
10． 快速在酒精燈火上加熱固定（注意：切忌過熱處理）
11． 加上xx微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
12． 室溫下孵育5分鐘
13． 小心抽去清理液
14． 加上xx微升染色液（Reagent B）在載玻片上
15． （選擇步驟）加上xx微升堿性液（Reagent C）（注意：如果需要觀察真菌結構成分）
16． 蓋上蓋玻片
17． 在室溫下，暗室里孵育5分鐘
18． （選擇步驟）移去蓋玻片，小心抽去染色液
19． （選擇步驟）小心加上xx微升清理液（Reagent A）在載玻片上，覆蓋樣品
20． （選擇步驟）小心抽去清理液
21． 封片處理
22． 置于熒光顯微鏡下觀察染色情況（100至400倍放大倍數）：激發波長365nm，散發波長425nm（類同DAPI濾波器）
真菌呈現絲狀體藍色熒光
注意事項
1． 本產品為20次操作
2． 本產品可以檢測各種真菌菌株，例如Alternaria alternata、Stemphylium botryosum、Cladosporium herbarum、Geotrichum candidum、 P. parasitica、Pyt. Aniderphermatum、Pyt. Ultimum、Fusarium oxysporum、Rhizopus stolonifer、Botrytis cinerea等
3． 操作時須戴手套
4． 操作時，嚴格無菌操作
5． 堿性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
6． 染色時，避免光照
7． 細胞染色前后的清洗過程中，小心操作
8． 如果有酵母污染，可見較大的球體或橢球體（elliposoid）、發芽體藍色熒光
9． 如果為細胞碎片，通?？梢姴灰巹t染色
10． 本公司提供系列細胞培養污染檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定熒光清晰
用 途: 本品用于科學研究使用。
上?？茐暨_生物專業生產胎牛，新生牛，小牛，大牛，馬，驢，豬，兔，羊，雞，狗，大鼠，小鼠，豚鼠等各種動物血清和各種動物血漿，紅細胞，抗凝血，裂解血，無菌脫纖維血等．并可為客戶實行血清，血漿，全血代加工業務。
上?？茐暨_生物科技有限公司主要銷售實驗室常用試劑、Elisa試劑盒、動物血清、血漿、全血、抗原抗體、pcr試劑盒、金標檢測卡、抗血清、生物試劑、培養基、標準品、對照品、細胞株、細胞因子、免疫檢測試劑盒等，上?？茐暨_生物是一家多年從事各種動物血清的研發、生產及銷售為一體的專業性生物公司。 公司產品包括：豬、 雞、 馬 、牛 ，羊、兔、鼠、猴、狗、貓、驢等各種動物的血清、血漿、全血、紅細胞、抗血清、抗體等。另外生產生化試劑千余種，從毫克到公斤的大小規格均可靈活訂購，2萬余種指標的ELISA酶聯免疫方法試劑盒，1000多種生化試劑盒，通用的免疫組化試劑盒，代測液相色譜、放免指標，收費合理，出數據快，真實可靠。
公司經銷小分子抑制劑上萬種，國內外蛋白、抗體、試劑、耗材、試劑盒、十余萬種，滿足您各種科研所需的要求，高?？蛻艨芍С重浀綀筚~付款，我司提供電子普票，產品金額滿500元以上均可包郵。 我司在上海有自己的細胞房，可定做各種耐藥株，普通細胞株，菌株，質粒，載體等產品，歡迎咨詢客服下單采購。
