細胞脂質比色法定量檢測試劑盒
細胞脂質比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
細胞脂質比色法定量檢測試劑是一種旨在通過脂溶性偶氮染料油紅O特異性地使細胞內中性甘油三脂、脂質以及脂蛋白顯示紅色或深紅色，在分光光度儀上進行比色分析，而獲得細胞脂質定量信息而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種呈單細胞層（Monolayer）生長的新鮮人體和動物細胞。用于成脂細胞定性、細胞病理學分析（脂質細胞瘤；LIPOID）等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，著色清晰。
技術背景
脂類物質（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類（STEROL）物質，脂類物質在機體中具有能量儲存的作用，是膜結構的組成成分和細胞信號分子。油紅O（OIL RED O），又稱為27號紅色溶劑（SOLVENT RED 27）、5B（SUDAN RED 5B），是優于氫醇染料溶劑（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。染色顯示細胞脂類物質呈紅色或深紅色。在分光光度計或酶標儀上（520nm波長）可以進行定量分析脂質含量。
產品內容
清理液（Reagent A） 毫升
固著液（Reagent B） 毫升
凈化液（Reagent C） 毫升
染色液（Reagent D） 毫升
溶解液（Reagent E） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存 染色液（Reagent D）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；確保瓶蓋密閉。 染色液（Reagent D），避免光照；有效保證6月
用戶自備
顯微鏡：用于觀察細胞脂質染色情況
平式搖蕩儀：用于染色萃取的混勻
比色皿或酶標板：用于比色分析的容器
分光光度儀或酶標儀：用于定量檢測細胞脂質含量情況
實驗步驟
1． 小心抽掉多孔細胞培養板里的培養液
2． 輕輕加入適量的 清理液（Reagent A）到每個培養孔里（見下表）
多孔培養板 | 容量 |
96 | xx 毫升 |
48 | xx 毫升 |
24 | xx 毫升 |
12 | xx毫升 |
6 | xx毫升 |
3． 小心抽去清理液
4． 小心加入適量的 固著液（Reagent B）到每個培養孔里（見實驗步驟2表）
5． 室溫下孵育10分鐘
6． 小心抽去固著液
7． 小心加入適量的 凈化液（Reagent C）到每個培養孔里（見實驗步驟2表）
8． 小心抽去凈化液
9． 小心加入適量的 染色液（Reagent D）到每個培養孔里（見下表）
多孔培養板 | 容量 |
96 | xx微升 |
48 | xx 微升 |
24 | xx 微升 |
12 | xx 毫升 |
6 | xx毫升 |
10． 在室溫下靜置15分鐘
11． 小心抽去染色液
12． 小心加入適量的 凈化液（Reagent C）到每個培養孔里（見實驗步驟2表）
13． 小心抽去凈化液
14． 重復實驗步驟12和13二次，或凈化液不再顯示粉紅色
15． （選擇步驟）置于一般光學顯微鏡下觀察染色情況：脂滴（LIPID DROPLET）呈現深紅色
16． 小心加入適量的 溶解液（Reagent E）（見下表）
多孔培養板 | 容量 |
96 | xx 微升 |
48 | xx 微升 |
24 | xx 微升 |
12 | xx微升 |
6 | xx毫升 |
17． 輕輕搖動培養板，直到 溶解液（Reagent E）均勻分布
18． 置于平式搖蕩儀，在室溫下，孵育30分鐘，速度為50RPM
19． （選擇步驟）移入到比色皿
20． 即刻放進分光光度儀或酶標儀測讀，波長為520 nm
21． 構建細胞脂質定量曲線：橫座標（x軸）為細胞濃度（細胞量）；縱坐標（y軸）為樣品讀數（吸光單位OD值）
注意事項
1． 本產品為20次（24孔板）、50次（48孔板）、100次（96孔板）操作
2． 操作時須戴手套
3． 試劑瓶務必密封保存
4． 染色液（Reagent D）避免－20℃低溫保存，否則出現沉淀
5． 如果 染色液（Reagent D）出現沉淀，須過濾后再使用
6． 染色時，避免光照
7． 細胞染色前后的清洗過程中，小心操作，以免將細胞沖洗掉，而影響定量分析
8． 如果沒有520nm波長的濾波器，可以使用490nm波長替代
9． 如果細胞干擾測讀，建議移出溶解后上清到新的孔里測讀
10． 本公司提供系列脂質檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定著色清晰
用 途: 本品用于科學研究使用。
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