組織脂質比色法定量檢測試劑盒
組織脂質比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
組織脂質比色法定量檢測試劑是一種旨在通過脂溶性偶氮染料油紅O特異性地使組織細胞內中性甘油三脂、脂質以及脂蛋白顯示紅色或深紅色，在分光光度儀上進行比色分析，而獲得組織樣本脂質定量信息而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體組織樣本。用于組織成脂細胞定性、組織細胞病理學分析（脂質細胞瘤；LIPOID）等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，著色清晰。
技術背景
脂類物質（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類（STEROL）物質，。脂類物質在機體中具有能量儲存的作用，是膜結構的組成成分和細胞信號分子。油紅O（OIL RED O），又稱為27號紅色溶劑（SOLVENT RED 27）、5B（SUDAN RED 5B），是優于氫醇染料溶劑（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為XX，分子量為XX。染色顯示組織細胞脂類物質呈紅色或深紅色。在分光光度儀或酶標儀上（520nm波長）可以進行定量分析脂質含量。
產品內容
清理液（Reagent A） XX毫升
裂解液（Reagent B） XX毫升
染色液（Reagent C） XX毫升
溶解液（Reagent D） XX毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；試劑具有揮發性，確保瓶蓋密閉；染色液（Reagent C），避免光照；有效保證6月
用戶自備
15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器
1.5毫升離心管：用于樣品處理的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織
微型臺式離心機：用于樣品操作
比色皿：用于比色分析的容器
分光光度儀：用于定量檢測細胞脂質含量情況
實驗步驟
一、 樣品準備
1． 手術取出動物組織，并秤重以確定50毫克組織重量
2． （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入XX毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎組織
5． 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
6． 加入XX毫升預冷的裂解液（Reagent B）
7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻
8． 即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器
9． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）
10． 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
11． （選擇步驟）移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－YD30030.1）
12． 放進冰槽里待測
二、 測定準備
1． 準備好待測樣品，置于冰槽里備用
2． 設定好分光光度儀：520nm波長，并置零
三、 背景對照
1． 移取XX微升裂解液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管
2． 加入XX微升染色液（Reagent C）
3． 室溫下孵育15分鐘，避免光照
4． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入XX毫升裂解液（Reagent B）
7． 輕度渦旋震蕩
8． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
9． 小心抽去上清液
10． 重復實驗步驟6至9二次
11． 加入XX毫升溶解液（Reagent D）
12． 輕度渦旋震蕩，混勻
13． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
14． 轉移到比色皿
15． 即刻放進分光光度儀（520 nm波長）：獲得背景對照吸光讀數（OD）
四、 樣品測讀
1． 移取100微升上述制備的待測樣品到新的1.5毫升離心管
2． 加入XX微升染色液（Reagent C）
3． 室溫下孵育15分鐘，避免光照
4． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入XX毫升裂解液（Reagent B）
7． 輕度渦旋震蕩，混勻顆粒群
8． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
9． 小心抽去上清液
10． 重復實驗步驟6至9二次
11． 加入XX毫升溶解液（Reagent D）
12． 輕度渦旋震蕩，混勻顆粒群
13． 室溫下孵育30分鐘，避免光照
14． 轉移到比色皿
15． 即刻放進分光光度儀（520 nm波長）：獲得待測樣品吸光讀數（OD）
16． 實際吸光讀數（OD）：待測樣品吸光讀數—背景對照吸光讀數
17． 構建組織樣品脂質定量曲線：橫座標（x軸）為組織蛋白含量、組織重量、時間點或藥物處理濃度等；縱坐標（y軸）為實際樣品吸光讀數（OD）
注意事項
1． 本產品為20次操作
2． 操作時須戴手套
3． 試劑具有揮發性，務必密封保存
4． 染色液（Reagent C）避免－20℃低溫保存，否則出現沉淀
5． 如果染色液（Reagent C）出現沉淀，須過濾后再使用
6． 染色時，避免光照
7． 如果沒有520nm波長的濾波器，可以使用490nm波長替代
8． 本公司提供系列脂質檢測試劑產品
用 途: 本品用于科學研究使用。
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