此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。因為酶的催化效率很高，植物ELISA試劑盒間接地放大了免疫反應的結果，植物ELISA試劑盒使測定方法達到很高的敏感度。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既留存其免疫學活性，又留存酶的活性。 
操作注意事項：
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。植物ELISA試劑盒使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。