方法簡介
所謂的實時熒光定量PCR 就是通過對PCR 擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。在實時熒光定量PCR 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著 PCR 反應的進行，PCR 反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線。
RT-qPCR是由三個步驟組成:
1.反轉錄:依賴反轉錄酶將RNA反轉錄成cDNDA;
2. 擴增:用PCR的方法擴增cDNA;
3.檢測:實時檢測和定量擴增的產物.
RT-qRCR影響分析可靠性關鍵點（Key porint）:
1.分析結果依賴于模板的數量、質量以及合理的檢測方法設計
2.反轉錄反應的非標準化影響試驗的穩定性
3.數據分析應該高度客觀，如果不合理的分析，從分析結果中會得到混淆的錯誤結果，因此通過對RT-qPCR的每一組分進行質量評價以達到zui小化變異性，zui大化可重復性，而且還需要沿用一個通用的數據分析的指南。對基因表達分析的標準化的需要是與人類臨床診斷分析相適應的。