鈣黃綠素 AM 是一種膜滲透性熒光酯酶底物，通常用于檢測細胞活性和質膜完整性。作為一種近中性的底物，鈣黃綠素 AM 可以自由、無創地擴散穿過質膜并滲透到活細胞的胞質溶膠中。一旦進入細胞內，代謝活躍細胞中的胞質酯酶會迅速將非熒光鈣黃綠素 AM 底物水解成鈣黃綠素產物，并由具有完整質膜的細胞保留。由于死細胞缺乏酯酶活性，因此僅標記活細胞。在藍光激發下，鈣黃綠素發出強烈的綠色熒光，與細胞酯酶的活性和樣品中存在的活細胞數量成正比。與其他活細胞標記試劑（如 BCECF AM 或羧基熒光素二乙酸酯）相比，鈣黃綠素 AM 熒光更亮、光穩定性更好，低細胞毒性有利于細胞追蹤、細胞凋亡和細胞毒性的研究。
 

      AAT Bioquest 提供多種可供選擇的用于細胞活力分析的鈣黃綠素 AM 產品。除了傳統的綠色熒光鈣黃綠素 AM 之外，我們還提供發出藍色、橙色、紅色和深紅色熒光的鈣黃綠素 AM 衍生物。

鈣黃綠素活性染料選擇指南

Calcein Blue AM, Calcein Orange™ Diacetate, Calcein Red™ AM, and Calcein Deep Red™ AM 用于多功能分析

Calcein AM ( 22004 ) 是細胞活星的主要指標，它具有被動的細胞內擴散、低細胞毒性、出色的細胞保留以及在生理 pH 范圍內的強熒光強度。因此，鈣黃綠素在 ~ 521 nm 處的熒光發射值使得與 GFP 轉染細胞或其他綠色熒光指示劑結合使用以進行多重分析具有挑戰性。為了解決鈣黃綠素 AM 的單一顏色限制，AAT Bioquest 開發了具有多種顏色選擇的鈣黃綠素衍生物，包括鈣黃綠素藍 AM、鈣黃綠素橙™ AM、鈣黃綠素紅™ AM 和鈣黃綠素深紅™ AM 染料，用于多色標記和活細胞的功能分析（表 1）。
 

Calcein Blue AM

Calcein Blue AM (22007) 是一種 UV-light 可激發活性指示劑，可在 pH 4-11 下發出明亮的藍色熒光 (Em = ~441)，專為與檢測藍色熒光的儀器一起使用。它可以與磷脂酰*氨酸染色劑Annexin V iFluor® 488 (20071) 和核酸死細胞染色劑7-AAD (17501) 結合使用，用于活/凋亡/壞死細胞群的三色區分（圖 1），如以及用于多色功能分析的 GFP、RFP 和其他綠色或紅色熒光探針。
 

Calcein Orange™ Diacetate

Calcein Orange™ diacetate (22007)   是藍/綠光可激發活力指示劑，可發出明亮的橙色熒光 (Em = ~545 nm)。與 calcein AM 一樣 .Calcein Orange™ diacetate 是一種非熒光透膜底物，需要酯酶水解才能激活其熒光，Calcein Orange™ 在質膜未受損的活細胞中具有出色的細胞滯留性，使其成為一種有價值的細胞示蹤劑和活細胞標記試劑。它可以與藍色或綠色熒光探針結合使用，例如 Hoechst 33342 (17535, 圖 2) 或者鈣指示劑 Cal-520^® AM (21130),
 

Calcein Red™ AM and Calcein Deep Red™ AM

 Calcein Red™ AM (21900) 和 Calcein Deep Red™ AM (22011). 在被胞質酯酶水解后, Calcein Red™ (Ex/Em = 562/576 nm) 和Calcein Deep Red™ (Ex/Em = 643/663 nm) 被細胞膜完整保留并在對應的光源激發下發出黃色或紅色熒光 ，Calcein Red™ AM 和 Calcein Deep Red™ AM 均可與藍色和綠色熒光探針結合使用

 

CytoCalcein™ Violet 450

=

Calcein Orange™ Diacetate

Calcein Deep Red™ AM

 用Calcein™ Blue AM (blue,22007), Annexin V iFluor® 488 (green, 20071), 和 7-AAD (red, 17501).;對 Staurosporine 處理的 Jurkat 細胞進行染色；使用Calcein Orange™ diacetate (22007) 和 核酸染料Hoechst 33342 (17535).; 流式細胞術分析用2 µM Calcein Deep Red™ AM (22011, 紅色）染色的活 Jurkat 細胞和在 55°C 水浴中處理 30 分鐘的死細胞群（綠色）使用 NovoCyte 3000 流式細胞儀。 
 

表1.鈣黃綠素，AM特性

CytoCalcein™ Violet Viability 針對流式細胞術和成像進行了優化

CytoCalcein™ Violet 450 和 CytoCalcein™ Violet 500 針對流式細胞儀的使用進行了優化， 將非熒光 CytoCalcein™ Violet 450 AM 和 CytoCalcein™ Violet 500 AM 酶促轉化為高熒光 CytoCalcein™ Violet 450 和 CytoCalcein™ Violet 500 產品（Ex/Em maxima ~406/445 nm，在大多數流式細胞儀中都有發現。結合帶有紅色熒光核酸死細胞染料的碘化丙錠（PI，Ex/Em maxima ~537/618 nm）或 7-Aminoactinomycin D（7-AAD，Ex/Em ~549/648 nm），CytoCalcein™ Violet 染料是出色的熒光團，用于膜完整性和酯酶活性對活細胞和死細胞進行雙色區分。去除代表死細胞的數據點是提高流式細胞術分析準確性的關鍵步驟。

CytoCalcein™ Violet 450 和 CytoCalcein™ Violet 500 可作為 1 mg 單位規格的獨立試劑使用。此外，CytoCalcein™ Violet 450 在 Cell Meter™ 細胞活力檢測試劑盒中用作活力指示劑 *405 nm 激發的藍色熒光* (22784)。該試劑盒提供優化的細胞標記方案和充足的試劑，包括 CytoCalcein™ Violet 450、DMSO 和緩沖液，可使用 200 µL 分析體積和標準熒光酶標儀進行 500 次測試。還可用于標記活細胞，用于熒光流式細胞術和細胞功能的顯微研究。

 

CytoCalcein™ Violet 450

CytoCalcein™ Violet 450 ( 22012 ) 的激發和發射光譜。
 

CytoCalcein™ Violet 500

 CytoCalcein™ Violet 500 ( 22013 ) 的激發和發射光譜

Table 2. 用于流式細胞術的細胞鈣素AM活性染料的特性