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上海雅吉生物科技有限公司
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Bst2.0 HNB變色擴增試劑盒
2021-6-1 閱讀(1696)
| 在核酸分子的恒溫擴增過程中，無論采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等擴增技術，這種高速度的擴增特性，均不可避免的引起假陽性擴增。這種假陽性的擴增情況在LAMP擴增中表現尤為明顯，由于LAMP擴增用到很高濃度的引物，因此難免保證有少量錯配和引物Dimer，這些輕微的污染都會導致在LAMP高速擴增中造成假陽性。HaiGene優化的反應緩沖液，配合的顯色技術和陰性控制技術建立的預混恒溫mix系列產品，可高靈敏度、高特異性的用于LAMP HNB變色、LAMP紅黃變色、LAMP OG變色、 LAMP 濁度分析、LAMP SYBR Green熒光檢測、HDA熒光檢測、RCA熒光檢測、CPA熒光檢測、SMAP熒光檢測的擴增反應。在LAMP擴增實驗中，與其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能，HaiGene的 Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的擴增速度和雜質耐受性。 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶對dUTP底物的*識別能力，擴增反應所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP*取代，因此擴增產物均包含dUTP，在配合熱敏UDG的情況下，氣溶膠污染物，將會在起始反應階段被*清除。而后續熱敏UDG在65℃條件下3min內，*不可逆失活；從而既能消除污染物，又能保證核酸正常擴增。因此，應用該試劑能大大降低LAMP反應中由于氣溶膠污染造成的假陽性信號。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
使用特征 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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以2019-nCov核酸擴增為例三種方法的性能比較 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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實例展示 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1、A3824-01 紅黃變色反應（肉眼觀察） 以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 30min 后。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 2、A3824-02 搭配 OG 橙綠變色反應管（A3821）（肉眼觀察） 以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 20min 后。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 3、A3824-03 用于熒光檢測（便攜式恒溫檢測儀） 以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 26min 后。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 4、A3802 用于HNB變色擴增反應 采用環引物對7個樣本（HHV-6 DNA核酸模板進行恒溫HNB變色檢測反應），NTC為不加模板的對照，產物以HNB顯色如下圖。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix擴增獲得三種基因產物（AFSV P72,N Gene-1， N Gene-2），然后以105拷貝的含U產物作為模板，分別用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 進行擴增，反應結束后統計兩組之間的Ct，結果為：UDG組在30min內幾乎不起峰，無信號；未加UDG組均在4min之前起峰，表明該Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）具有良好的去除殘留模板的能力。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 關于LAMP核酸擴增的技術與商標：LAMP核酸擴增技術由日本榮研化學株式會社所擁有（號CN1420928A/CN1222614C）。除此外，LAMP商標也隸屬日本榮研化學株式會社。關于LAMP的商業化核酸檢測和商標授權使用，請聯系榮研生物科技(中國)有限公司。HaiGene提供的恒溫擴增原料用酶與預混Mix系列產品，可用于LAMP擴增反應，但并不僅限于LAMP擴增，還可以進行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP（Smart Amplification Process）、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒溫擴增方法。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
