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抗體相關(guān)基本知識
2021-1-7 閱讀(2448)
一、抗體的基本結(jié)構(gòu)
經(jīng)x線晶體衍射結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，抗體Ig由四條多肽鏈組成，各肽鏈之間由數(shù)量不等的鏈間二硫鍵連接。Ig可形成“Y”字型結(jié)構(gòu)，稱為Ig單體，是構(gòu)成抗體的基本單位。
（一）重鏈和輕鏈
二、抗體的制備流程
1. 蛋白類抗原：對于天然易獲取的蛋白可以純化后直接作為免疫原；對于天然含量較少或難以提取的蛋白，可以通過基因工程重組表達(dá)的方式獲取。同時也可以選擇蛋白的特定的連續(xù)片段做多肽合成作為抗原，較短的多肽是半抗原，通常免疫原性較弱，需要進(jìn)一步偶聯(lián)載體蛋白(可選KLH、BSA、OVA)才能作為免疫原。
2. 小分子化合物：化合物抗原同樣是半抗原，也需要進(jìn)一步偶聯(lián)載體蛋白才能作為免疫原。為了便于偶聯(lián)載體蛋白，特定的化合物還需要進(jìn)行分子改造以便能成功偶聯(lián)。
3. 病原體：滅活的病毒或細(xì)菌可以直接作為免疫原。
抗原
是一類在適合條件下能激發(fā)機體免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)生的效應(yīng)物質(zhì)（抗體和效應(yīng)細(xì)胞）在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)。
抗原決定簇(antigenic determinant)
指抗原上那部分可以引起機體產(chǎn)生抗體的具有特殊立體構(gòu)型和免疫活性的分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)基團，叫做抗原決定簇。由于抗原決定簇通常位于抗原分子表面，因而又被稱為表位(epitope)。
•構(gòu)象決定簇(conformational determinants): 又稱為不連續(xù)決定簇(discontinuous determinants)，是抗原中由分子基團間特定的空間構(gòu)象構(gòu)成的決定簇，一般是由分子中不連續(xù)的若干肽鏈盤繞折疊而構(gòu)成。
（二）抗體的克隆性(Clonity)
一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇，因而使機體產(chǎn)生好幾種不同的抗體，終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對一個抗原決定簇起作用的B細(xì)胞群或漿細(xì)胞群就是一個純系，純系的英文為Clone，音譯就是克隆。由一種B細(xì)胞群或漿細(xì)胞克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)，彈 ，精，確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一種抗原刺激機體，也存在多種抗原決定簇，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體。
（三）抗體的純化
我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體，血清蛋白以及其他各種雜蛋白等，在制備特異性抗體過程中當(dāng)抗體的效價達(dá)到實驗預(yù)期之后，需要對免疫血清進(jìn)行純化提取得到效價更高，特異性更強，穩(wěn)定性更好的抗體。
目前，大多數(shù)商品化抗體使用Protein A或Protein G進(jìn)行純化。由于protein A或protein G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合。Protein A或protein G 作為配基可以被偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，當(dāng)抗血清從中流過時，特異性的IgG就與配基結(jié)合，其他雜蛋白則穿流而過。因兩種蛋白純化抗體時對不同宿主的抗體的結(jié)合能力不同，我們需要具體情況，分別選擇protein A 或protein G, 或者是protein A/protein G組合。一般兔抗（包括單克隆蛋白與多克隆抗體）、小鼠單抗IgG2a、IgG2b、IgG3, 選擇用protein A純化；而小鼠、大鼠和山羊的多克隆抗體、小鼠單抗IgG1、大鼠單抗，則選擇用protein G純化。
