細胞:H2009細胞
中文名稱:人肺腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:MEM+10%FBS +1%ITS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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CRISPR/Cas9基因編輯系統,Cas9蛋白可以結合并切割任意DNA。一種新方式使用Cas9,讓它激活特定基因的轉錄,從而表達或抑制特定的遺傳學性狀。把Cas9與延長了三倍的轉錄因子融合起來,使其能夠強力控制單個或多個基因的表達。
在基因工程領域,能控制遺傳學性狀的旋鈕越多越好。它們可以控制多個基因,決定特定遺傳學性狀的表達或表達程度。現在我們可以極為精確的上調或下調基因表達。在體外培養的酵母、小鼠和人類細胞中證實了這一技術操縱基因表達的能力。
人類基因組90%的區域并不翻譯成蛋白質,曾經被認為是無用的垃圾。后來發現,這一區域的基因以一種神秘的方式起作用,而且這些基因往往串聯起來發揮作用。開發的新方法,可以靶標和激活這些人們知之甚少的DNA暗物質。
除了揭開DNA暗物質的秘密,Cas9還能將合成的基因環引入基因組,觸發全新的基因表達或者改變基因表達。用 Cas9精確操縱一連串基因,對干細胞工程也有很大的幫助,有助于開發移植用的器官和再生療法。
必須加快對發育生物學的理解,可以快速干擾和分析大量基因組合,大大提升鑒定發育通路的速度。
誘導干細胞分化成大腦神經元。Cas9在編程神經元發育時比傳統方法好40倍。