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培養(yǎng)基為您介紹配置細胞營養(yǎng)懸液步驟

時間:2014/8/5閱讀:598
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培養(yǎng)基為您介紹配置細胞營養(yǎng)懸液步驟

  1.培養(yǎng)基用細胞培養(yǎng)液等量混合效應細胞和靶細胞,30℃水浴10分鐘。室溫中250×g離心5分鐘,去上清液。同量靶細胞不加效應細胞同樣處理作為對照。

  2.用少量細胞培養(yǎng)液輕輕懸浮細胞,吸管上下吹打5~6次。這一分散細胞的步驟關(guān)系到試驗的準確性和重復性,應當設(shè)法保持技術(shù)的一致性。取少許細胞懸液,稀釋后直接在顯微鏡下計數(shù)效應細胞和靶細胞的結(jié)合率,即平均每100各淋巴細胞中結(jié)合了靶細胞的效應細胞的數(shù)目。

  3.其余的細胞培養(yǎng)基懸液與等量液態(tài)(37℃)的0.5%低熔點瓊脂糖混合均勻,鋪在培養(yǎng)皿中,厚度≤2mm。固化后小心加入適量細胞培養(yǎng)液覆蓋瓊脂糖層,置37℃5%CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~4小時。

  4.吸去培養(yǎng)液,加入適量0.1%臺盼藍覆蓋瓊脂糖層,室溫染色5分鐘。吸去染色液,加入適量0.2%甲醛覆蓋瓊脂糖層,室溫固定5分鐘。

  5.在顯微鏡下死亡細胞呈藍色,計數(shù)靶細胞的死亡率。靶細胞的自發(fā)死亡率可以從經(jīng)同樣處理的靶細胞對照培養(yǎng)皿中測得。如區(qū)分效應細胞和靶細胞有困難,可以用雙醋酸熒光素染色加以區(qū)分。鏡下計數(shù)。 

細菌總數(shù)測定,細菌傳代培養(yǎng) Nutrient Agar 培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂(NA)   250
用于霍亂弧菌的選擇性分離,后加亞碲酸鉀 No.4 Agar Base 四號瓊脂基礎(chǔ)      250
選擇性培養(yǎng)基,用于沙門氏菌,志賀氏菌的選擇性分離 Salmonella-Shigella Agar SS 瓊脂      250
弱選擇性培養(yǎng)基,用于腸道菌的選擇性分離 Eosin-Methylene Blue Agar 伊紅美藍瓊脂(EMB)    250
用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選(葡萄糖,乳糖,蔗糖) Triple Sugar Iron Agar 三糖鐵瓊脂(TSI)    250
選擇性培養(yǎng)基,用于志賀氏菌的選擇性培養(yǎng)(FDA標準) 培養(yǎng)基Xylose Lysine Desoxycholate Agar XLD 瓊脂       250
用于抗生素敏感試驗 Mueller-Hinton Broth MH 肉湯(MHB)    250
用于抗生素敏感試驗 Mueller-Hinton Agar MH 瓊脂(MHA)    250
弱選擇性培養(yǎng)基,用于腸道致病菌的選擇性分離 China Blue Agar 中國藍瓊脂      250
用于細菌復合生化試驗(葡萄糖,乳糖) Kligler Iron Agar 克氏雙糖鐵瓊脂     250
供分離營養(yǎng)要求非常高的致病菌用,后加血液制成血平板 Blood Agar Base N0.2 血瓊脂基礎(chǔ)2號 250
供分離營養(yǎng)要求較高的致病菌用,后加血液制成血平板 Blood Agar Base 血液瓊脂基礎(chǔ)      250
用于從血液中分離病原菌 Blood Enrichment Medium 血液*     250
用于分離真菌,酵母菌等 TTC-Sabourand’s Medium 氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基   250
用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法) Maconkey Agar 麥康凱瓊脂      250
用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法) Maconkey Agar(without salt) 麥康凱瓊脂(不含鹽)     250
用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)基培養(yǎng)(OXOID方法) Maconkey Agar No.2 麥康凱瓊脂2號      250
用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法) Maconkey Agar No.3 麥康凱瓊脂3號      250
用于分離霍亂弧菌 Alkaline Agar 堿性瓊脂平板     250
用于分離霍亂弧菌 Alkaline Bile Salt Agar 堿性膽鹽瓊脂     250

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