操作步驟

⑴、石蠟切片脫蠟至水。

⑵、 3%H 2 O2 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內源性過氧化物酶的活性。

⑶、蒸餾水沖洗， PBS 浸泡 5 分鐘 x2 （如需抗原修復，可在此步后進行）。

⑷、 5-10% 正常山羊血清（PBS 稀釋）封閉，室溫孵育 10 分鐘，傾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小時或 4 ℃ 過夜。

⑸、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑹、滴加適量 *標記二抗 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑺、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標記的鏈霉卵白素 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑼、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。抗原

⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘（DAB 或 NBT/BCIP）

⑾、自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。

化染色步驟

冰凍切片 4-8μm ，室溫放置 30 分鐘后，入 4 ℃丙酮固定 10分鐘，PBS洗，5分鐘x3，用過氧化氫孵育5-10分鐘，消除內源性過氧化物酶的活性。抗原