在ELISA試劑盒中雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的辦法,操作過程如下：
1.將特異性抗體與固相載體聯結，構成固相抗體。洗刷除掉未結合的抗體及雜質。
2.加受檢標本，保溫反響。標本中的抗原與固相抗體結合，構成固相抗原抗體復合物。洗刷除掉其他未結合物質。
3.加海標抗體，保溫反響。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗刷未結合的酶標抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與紜本中受檢抗原的量相關。
4.加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色物。經過比色，測知標本由抗原的量。
在臨床查驗中，此法適用于檢測各種蛋白質等大分子抗原，例如HbsAg、HbaAg、AFP、HCG等。只需取得針對受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而樹立此法。如抗體的來歷為抗血清，包被和海標用
ELISA試劑盒的抗體別離取自不同種屬的動物。如使用單克隆抗體，一般挑選兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，別離用于包被固相和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很髙的特異性，并且能夠將受檢標本和酶標抗體一同保溫反響。