一、小鼠感染模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)核心要素
明確研究目標(biāo)
基礎(chǔ)機(jī)制研究（如免疫逃逸）→ 需高分辨率檢測（單細(xì)胞測序、多色流式）
治療評價（如抗生素）→ 需設(shè)定明確的療效終點(diǎn)（生存率、組織載量降低倍數(shù)）
小鼠選擇策略
6-8周齡（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)） vs. 老齡鼠（模擬年齡相關(guān)免疫衰退）
常規(guī)研究：C57BL/6（Th1傾向）、BALB/c（Th2傾向）
免疫缺陷模型：SCID、NOD-scid、NSG（適合人源化感染研究）
品系：
年齡：
性別：雌性可能對某些病原體更敏感（如HSV-2）
病原體關(guān)鍵參數(shù)
臨床分離株（如SARS-CoV-2 Delta變異株） vs. 實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)株（如鼠適應(yīng)流感病毒PR8）
保存條件：病毒需-80℃分裝避免反復(fù)凍融，部分細(xì)菌需活菌傳代保持毒力
二、小鼠感染模型構(gòu)建精準(zhǔn)感染技術(shù)（以呼吸道VS全身感染為例）
1. 呼吸道感染（以流感病毒為例）
麻醉優(yōu)化：
使用酮胺/甲苯噻嗪混合麻醉（比異fu烷更持久），防止鼻內(nèi)接種時嗆咳接種體積：
鼻內(nèi)滴注：≤50μL（避免窒息）
氣溶膠：使用Glas-Col系統(tǒng)，控制粒徑1-3μm直達(dá)肺泡
劑量控制：
預(yù)實(shí)驗(yàn)測試100-10^4 PFU梯度，選擇導(dǎo)致20%體重下降的劑量（非致死性模型）
2. 全身性感染（以敗血癥模型為例）
CLP（盲腸結(jié)扎穿孔）：
16G針頭穿孔2次模擬重度敗血癥
術(shù)后需皮下補(bǔ)液（1mL生理鹽水）
細(xì)菌靜脈接種：
金黃色葡tao球菌（1×10^7 CFU/尾靜脈）→ 監(jiān)測血培養(yǎng)陽性時間
三、動態(tài)監(jiān)測方案設(shè)計(jì)
| 時間點(diǎn) | 檢測指標(biāo) | 技術(shù)方法 |
|---|---|---|
| 0-24h | 病原體早期定植 | 活體成像（熒光標(biāo)記病原體） |
| 3dpi | 炎癥峰值 | Luminex多因子檢測 + 肺組織H&E染色 |
| 7dpi | 免疫記憶形成 | 抗原特異性Tetramer檢測 |
特殊模型需求：
持續(xù)性感染（如HBV）：需使用 hydrodynamic injection 遞送HBV基因組
慢性炎癥模型：反復(fù)低劑量感染（如每周1次鼻內(nèi)接種支原體）
四、對照設(shè)置進(jìn)階策略
遺傳背景對照：
用IFNAR1-/-小鼠驗(yàn)證I型干擾素的作用
微生物組干擾控制：
抗生素預(yù)處理后定植單一菌群（如人源糞菌移植）
治療對照：
設(shè)置亞治療劑量組（如0.5×MIC抗生素）觀察反彈現(xiàn)象
五、關(guān)鍵問題解決方案
感染不均一性：
采用混勻組織勻漿后梯度稀釋培養(yǎng)（非單點(diǎn)取樣）免疫過度激活干擾：
使用TLR4突變小鼠（C3H/HeJ）研究內(nèi)毒素非依賴途徑模型人源化不足：
人ACE2轉(zhuǎn)基因小鼠或造血系統(tǒng)人源化小鼠（HIV研究）
六、前沿技術(shù)整合
單細(xì)胞感染動力學(xué)：
使用REPLICON-seq技術(shù)追蹤單個細(xì)胞內(nèi)病原體復(fù)制局部微環(huán)境分析：
激光捕獲顯微切割（LCM）分離感染灶進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組分析人工智能預(yù)測：
訓(xùn)練深度學(xué)習(xí)模型根據(jù)早期臨床評分預(yù)測疾病結(jié)局
