小鼠胰島瘤細胞 （MIN6）

【資料簡介】

小鼠胰島瘤細胞

（MIN6）

 

細胞特性

1） 來源：小鼠胰島瘤

2） 含量：>1x10⁶ 個/mL

3） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞培養步驟

一． 培養基及培養凍存條件準備：

1) 準備1640培養基；澳洲胎牛血清，10%；雙抗1%；添加50uMβ-巰基乙醇。

2) 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中培養，補加培養基至6ml。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2ml*培養基終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

      1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml*，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

      2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X10⁶個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。