牛免疫球蛋白G（IgG） ELISA試劑盒說明書

【資料簡(jiǎn)介】

牛免疫球蛋白G(IgG) ELISA試劑盒僅供研究使用

目的：本試劑盒用于測(cè)定牛血清，血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白 G(IgG)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛免疫球蛋白 G(IgG)水平。用純化的 IgG 抗體包被
微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 G(IgG)，再與 HRP 標(biāo)記
的 IgG 抗體結(jié)合， 形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物， 經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB
在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中
的免疫球蛋白 G 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值） ，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線
計(jì)算樣品中牛免疫球蛋白 G(IgG)濃度。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
分） 。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞
濃度達(dá)到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分
鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
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5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上
進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性

詳細(xì)說明書見附件！