新一代蛋白研究工具——抗體芯片（圖）

【資料簡介】

蛋白組學(xué)研究是即基因組學(xué)研究后的生命科學(xué)發(fā)展的一個(gè)大方向之一。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能zui終直接影響著生命活動(dòng)的變化，基因轉(zhuǎn)錄水平的研究只能在一定程度上反映基因表達(dá)產(chǎn)物的變化，而真正發(fā)揮功能的蛋白要經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯調(diào)控以及翻譯后加工等許多步驟和調(diào)控才能形成，因而對(duì)蛋白質(zhì)的直接研究才能真實(shí)的解釋各種生命現(xiàn)象。但是目前研究蛋白質(zhì)的手段和方法還沒有很大的發(fā)展，所以尋找有效、快捷的蛋白分析技術(shù)成為了至關(guān)重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。

蛋白芯片技術(shù)的出現(xiàn)給蛋白組學(xué)研究帶來新思路。蛋白組學(xué)研究中一個(gè)主要的內(nèi)容就是要研究在不同生理狀態(tài)或病理狀態(tài)下蛋白水平的量變，微型化，集成化，高通量化的抗體芯片就是一個(gè)非常好的研究工具，它也是蛋白芯片中發(fā)展zui快的芯片，而且在技術(shù)上已經(jīng)日益成熟。這些抗體芯片有的已經(jīng)在向臨床應(yīng)用上發(fā)展，比如腫瘤標(biāo)志物抗體芯片等，還有很多已經(jīng)用在研究的各個(gè)領(lǐng)域里。

*張商品化的抗體芯片是由美國BD Clontech公司推出的。這是一張用于研究的抗體芯片，芯片上排列了378種已知蛋白的單抗（Ab Microarray 380，目錄號(hào) K1847-1），這些單抗對(duì)應(yīng)的蛋白都是細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上十分重要的蛋白，涉及信號(hào)傳導(dǎo)、腫瘤、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡和神經(jīng)生物學(xué)等廣泛的領(lǐng)域。通過這張芯片，我們?cè)谝淮螌?shí)驗(yàn)中就能夠比較幾百種蛋白的表達(dá)變化。

Ab Microarray 380上抗體是經(jīng)過精心挑選的，這些抗體不僅可以識(shí)別人源的蛋白，對(duì)小鼠和大鼠樣品同樣有效。另外，每個(gè)抗體的結(jié)合親和力都經(jīng)過了實(shí)驗(yàn)測(cè)定，從多種抗體來源的克隆中篩選出反應(yīng)特異性好，交叉反應(yīng)程度小，信號(hào)明顯的抗體，并且還要保證信號(hào)與抗原濃度有著良好的線性關(guān)系。優(yōu)化的抗體探針才可以保證反應(yīng)的特異和靈敏（可檢測(cè)20pg/ml的抗原濃度）。芯片的檢測(cè)是用熒光報(bào)告分子，常用的熒光掃描儀都能夠完成。

*代的蛋白芯片和DNA芯片一樣是作為一種定性分析的工具，可用于分析樣品之間相關(guān)蛋白的相對(duì)表達(dá)豐度；還可以作為DNA芯片的補(bǔ)充，用于研究蛋白和基因表達(dá)之間的關(guān)系。

操作流程

Ab Microarray 380抗體芯片并不要求特殊的實(shí)驗(yàn)操作，只要一般常規(guī)的操作就可以完成以往極為復(fù)雜耗時(shí)的工作。整個(gè)操作流程包括：從50～200mg組織或細(xì)胞、體液中進(jìn)行蛋白質(zhì)抽提——用Cy5和Cy3兩種不同顏色的熒光分子分別標(biāo)記兩個(gè)樣品——洗去多余的標(biāo)記分子——與芯片雜交孵育——掃描分析結(jié)果。整個(gè)過程從樣品制備到結(jié)果分析只要一天即可完成，你只要準(zhǔn)備好樣品、熒光染料、脫鹽純化柱（處理體液樣品時(shí)用）和熒光掃描儀，其他的試劑全部由試劑盒提供。