轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的含量測定

【資料簡介】

中轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的含量測定實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)水平。用純化的人轉(zhuǎn)化
生長因子β(TGF-β)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)化生
長因子β(TGF-β)，再與HRP 標記的轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-
酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)呈正相
關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人轉(zhuǎn)化生長
因子β(TGF-β)濃度。

中轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的含量測定

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞
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濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分
鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?BR>用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

中轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的含量測定