乙酰*酯酶的活力測定

【資料簡介】

                                                        乙酰*酯酶的活力測定
一. 簡介

乙酰*酯酶 acetylcholine esterase EC3.1.1.7：簡稱AchE（也稱真性*酯酶），活性高，選擇性水解Ach的必需酶，能使乙酰*（ACh）水解成*和乙酸。
　　*酯酶中的I型（即true choli-neesterase）廢物特異性高，因為只分解以乙酰*為中心的狹窄范圍的底物，故特此這樣稱呼。

1、AchE在神經肽代謝中的作用
　　Chubbe等的研究證明，AchE具有羧肽酶和氨肽酶的活性。在體外，AchE能水解腦啡肽（Enk）和P物質（SP），但不能水解*（Som）和血管加壓素（VSP）等。進一步的研究證明，AchE作為肽酶，其水解肽的活性部位和作為酯酶的活性部位不同。值得注意的是，神經系統許多非*能的，含大量AchE的神經元同時亦含有各種神經肽類物質。如脊髓背根節的SP能細胞即是AchE強陽性。
　　zui近的研究顯示，高度純化的來自電鰻電器官或牛血清的AchE具有蛋白酶樣或外切酶的活性。對于血清蛋白質，AchE能發揮C端殘基的清除作用。此外，AchE的蛋白酶樣作用還得到分子生物學證據的支持，氨基酸分析顯示，AchE蛋白質分子與蛋白酶樣內切酶以及血清羧肽酶的氨基酸序列相似。在它們的C端36個殘基范圍內，有40%氨基酸序列和蛋白酶的活性片段相同。
2、AchE的電生理和行為效應

（1）AchE的樹突/胞體釋放
　　樹突/胞體釋放是神經分泌的一種特殊形式。黑質多巴胺神經元屬非*能，似乎很少接受*能傳入投射，但黑質細胞內含有大量AchE。研究發現，腦內的AchE可以有膜結合型和非膜結合型（可溶的）兩種形式，黑質多巴胺能神經元的樹突或胞體能夠將AchE（可溶型）分泌到細胞外液中，稱為AchE樹突釋放現象。顯然，AchE的樹突釋放現象和Ach的釋放無關。因為應用*能阻斷劑或拮抗劑并不能影響AchE的樹突釋放。同時，AchE在腦室內的分布以及腦脊液中的含量都和Ach不一致，由于電鏡觀察在黑質內沒有發現樹突觸的存在，所以黑質內經樹突或胞體釋放出的物質能相對自由的擴散。因此，在黑質AchE可能發揮一種非突觸性的調節作用，以調節黑質一紋狀體投射神經元的胞體對其遠端樹突傳入信號的敏感性。

（2）AchE的電生理及行為效應
　　研究發現細胞外AchE能改變黑質多巴胺神經元的電活性及動物的運動行為。大劑量應用時，AchE抑制黑質多巴胺能細胞的自發放電，但在生理學劑量時它能增加黑質細胞的放電頻率。Creenfield通過體外培養細胞內記錄方式發現在灌流中加入AchE能引起黑質細胞膜的顯著超極化，并伴有膜輸入電阻的降低，用不可逆性的*酯酶抑制劑蘇曼（soman）預先處理AchE，然后將其加入腦片培養液中，不能改變AchE對膜的電學性質的影響。上述實驗表明，AchE對黑質多巴胺能神經元膜有電學特性的作用與AchE水解Ach作用無關，并還具有高度結構特異性。
　　應用微電極直接將AchE注射到大鼠的黑質內，結果引起大鼠的運動行為改變，表現為行動遲緩和木僵狀態。一次AchE注射后大鼠的行為變化可持續相當長的時間，其機制尚不清楚。推測在生理狀態下，AchE從黑質多巴胺能細胞的樹突釋放后，能對其本身和鄰近細胞的生理活動產生一定影響，這可能是一種新的神經元之間局部或自身后饋調節的方式。