Y190 感受態細胞100ul*50操作方法說明

【資料簡介】

 

              Y190 感受態細胞100ul*50操作方法說明

 

    本公司試劑在科研界得到了長足發展，除了在其質量和價格上取勝，同時還堅守完善的售前售后服務，而這些正是我司的經營理念和成功經驗。在此我們真誠的希望能夠與更多的科研單位獲得的友情合作!接下來介紹Y190 感受態細胞100ul*50操作方法說明

操作方法:

1. 取-80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。

2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，次使用前做預實驗確定所加質粒的量），用手管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時。

. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天

注意事項

1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。

2. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量。

4. 濃度不應高于25 μg/ml，過高的濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。

5. 培養基中加入的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失，但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時不考慮這些抗生素，Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。