免疫金銀染色法

【資料簡介】

1、實驗原理

彩色免疫金銀染色法是抗原位點處生成的銀顆粒經鐵氰化鉀與*的作用被氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑反應被還原成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產物使彩色還原劑由無色變為有色的染料并沉積在銀顆粒部位，金屬銀變成銀離子。

2、試劑及材料

Lugol’s碘液，含5%*和1%亞硫酸鈉溶液，2%鐵氰化鉀和1%*溶液。

3、操作方法

（1）石蠟切片常規脫蠟水合（細胞甩片、爬片或冰凍切片固定后用TBS洗）；

（2）依次與0.1%*，37℃，消化30min；Lugol’s碘液5min；5%*1min；TBS洗5min；

（1）加1%的卵蛋白，室溫15min ，TBS洗5min；加適當稀釋的一抗，置濕盒內，4℃過夜；

（2）TBS洗三次，每次5min，加1%的卵蛋白，室溫15min；

（3）TBS洗5min，加適當稀釋的膠體金標記的二抗，置濕盒內，4℃過夜；

（4）TBS洗三次，每次5min，再用蒸餾水洗后，將切片放入*顯色液，避光顯色5-10min；

（5）用蒸餾水沖洗，2%鐵氰化鉀和1%*作用1min；

（6）用蒸餾水沖洗，彩色顯色液顯影；

（7）用蒸餾水沖洗，依次與2%鐵氰化鉀和1%*作用1min；5%*和1%亞硫酸鈉作用5min，自來水沖洗，緩沖甘油封片；

4、結果觀察

鏡檢，抗原抗體反應處呈蘭色（a-萘酚）或綠色（菲尼酮）。

原文地址:/biotech/Immunity/2011/v81644278