通用RT-PCR 試劑盒（AMV）

【資料簡介】

                          通用RT-PCR 試劑盒(AMV)
規格：50T/100T

保存：-20℃保存，避免反復凍融，復檢期為1 年

產品簡介：
本試劑盒適用于各種RNA 制品的反轉錄反應以及隨后的PCR 擴增。它采用AMV 進行
反轉錄反應，能夠獲得更長的反轉錄產物。同時，在25ul 反轉錄體系和50ul PCR 反應體系
中，還可以一次性得到足夠量的PCR 產物用于后續的克隆實驗。
本試劑盒中配置的酶均為進口的酶。RT 酶采用進口的AMV，所以cDNA 更長，基因的
信息保留得更完整！反轉錄過程中特異的RNase 抑制劑可有效降低由于外源RNase 污染而導
致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA 克隆及目的基因檢測等分
子生物學實驗。

操作步驟：
一、反轉錄反應
1、在冰浴的無菌無RNase 的離心管中加入如下反應成分：
0.5ug RNA 模板
5ul Oligo(dT)16 引物
補RNase-free ddH2O 至11.5ul
2、70℃保溫5min 后迅速在冰上冷卻5min，簡短離心收集反應液后加入以下各組分：
5ul 5×AMV Buffer
2.5ul dNTPs
0.5ul RNasin
0.5ul AMV
補RNase-free ddH2O 至25ul
3、42℃溫浴60min，如果是用隨機引物，請將離心管置37℃溫浴60min。
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4、反應后將離心管置冰上，反應產物可用于進行后續實驗或-20℃保存。
二、PCR 反應
1、按以下各組分配制50ul PCR 反應體系：
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物（用戶自備10um） 1ul
下游引物（用戶自備10um） 1ul
RT 反應產物2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。

注意事項：
1、用于cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用DEPC 進行處理，并在高壓滅菌后使用。
有些試劑不能高壓滅菌時，首先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除
菌處理。
2、RNA 樣品要避免反復多次凍融，應使RNA 在冰浴中處于融化狀態。
3、如果PCR 效果不理想，可以適當優化條件，比如改變退火溫度或增加模板量。