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人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)實驗原理及操作步驟

2011年05月09日 10:52:36人氣:1222來源:上海勁馬實驗設備有限公司

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【資料簡介】

人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 B 細胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)水平。用純化的
人 B 細胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次
加入 B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2),再與HRP標記的B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)抗體結合,
形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 B 細胞淋巴
瘤因子 2(Bcl-2)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線
計算樣品中人 B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)濃度。
人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
80μg/L 5 號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40μg/L 4 號標準品 150μl的5 號標準品加入150μl標準品稀釋液
20μg/L 3 號標準品 150μl的4 號標準品加入150μl標準品稀釋液
10μg/L 2 號標準品 150μl的3 號標準品加入150μl標準品稀釋液
5μg/L 1 號標準品 150μl的2 號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行。

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