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ELISA方法的基本類型和操作程序分析

時間:2017/3/9閱讀:1118
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ELISA試劑盒價格根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱為布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中,又根據其性質不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競爭ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。

ELISA方法的基本類型有以上8種,常用的有間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法和雙夾心ELISA法三種:

.間接ELISA

ELISA試劑盒價格本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。 () 材料   ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;   ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;   ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。   (2) 方法步驟   ① 加抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干   ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干   ③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干   ④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘,加終止液   ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值,并計算出P/N比值。   (3) 結果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.,而且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下,如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.,而且待檢血清的OD值≥0.4,則判為陽性,否則判為陰性。

2.雙抗體夾心ELISA

本法主要用于檢測大分子抗原。現以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。   ① 加抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干   ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干   ③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干   ④ 加底物液 → 37℃ 5分鐘,加終止液   ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

3.雙夾心ELISA

ELISA試劑盒價格此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于:它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標記每一種抗體,還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為:   ① 加抗體(Ab-)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干   ② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干   ③ 加用非同種動物的特異性抗體(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干   ④ 加入酶標抗Ab-2抗體(AB-3)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干   ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液 ⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

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