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細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

時間：2016/8/17閱讀：1062
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細胞凋亡發(fā)生時，內源性核酸內切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA，但核小體本身由于由組蛋白緊密結合而免受切割，單克隆抗體可以與核小體形成夾心結構，可通過檢測核小體判斷細胞是否經(jīng)歷凋亡事件。
(一) 原理
細胞凋亡的發(fā)生，是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產(chǎn)生80bp～200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法，應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結構，可特異性檢測細胞溶解物中的核小體片段。
(二)材料與試劑
.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒，生物標記的小鼠抗組蛋白單克隆抗
體。
2.過氧化物酶(-POD)標記的小鼠抗DNA單克隆抗體
3.鏈霉親合素包被的微孔板
4.DNA-組蛋白復合物，作為陰性對照。
5.ABTS底物
6.溶解緩沖液
7.溫育緩沖液
8.底物緩沖液
(三)樣品
.培養(yǎng)細胞或離體細胞的裂解物細胞裂解步驟：收集細胞，離心后，用200µl溶細胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min。
2.培養(yǎng)細胞的上清液
3.血漿(血清)

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