、植物組織蛋白質提取方法
、根據樣品重量(g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。
3、用離心機離心8000rpm40min4℃或00rpm20min4℃
4、提取上清夜,樣品制備完成。
蛋白質提取液:300ml
、Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!
2、植物組織蛋白質提取方法
三氯醋酸—丙酮沉淀法
、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上小時)棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上小時),然后真空干燥沉淀,備用。
4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(5℃8000rpm以上小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。