綿羊鞭蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒技術(shù)的*性：

（一）靈敏度高

雖然酶活性調(diào)節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大ELISA中，檢測的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個摩爾濃度含6.02×1023個分子，那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達(dá)1.7×10-24mol/L。雖然在實(shí)際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達(dá)不到這個水平（大于104個分子），但表明Elisa在靈敏度方面的改進(jìn)潛力是很大的。

（二）特異性強(qiáng)

從免疫反應(yīng)的角度來說，Elisa與RIA的特異性應(yīng)該是。但在ELISA方法中，由于作用檢測指示劑的酶與其底物的反應(yīng)有專一性，從而增加了該方法的特異性。

（三）對儀器設(shè)備要求不高，測定成本低

Elisa測定在普通實(shí)驗(yàn)室便可進(jìn)行，常用的儀器設(shè)備包括加樣器、培養(yǎng)箱、酶標(biāo)專用讀數(shù)器等。按現(xiàn)有價格折算，酶標(biāo)儀的價格只及液閃儀的1/6至1/4，因此每測定一個樣本所需成本不及PIA的1/10至1/16。某些定性Elisa方法，還可在野外進(jìn)行，操作十分方便。

（四）方法快速、簡便

均質(zhì)酶免疫測定方法操作時，所有反應(yīng)試劑均在同一體系內(nèi)進(jìn)行，不需任何分離步驟，操作十分簡便、快速，數(shù)分鐘便能得出結(jié)果。某些定性Elisa試劑盒，如國外的某些奶牛發(fā)情鑒定和妊娠診斷Elisa試劑盒，數(shù)分鐘時間便能完成一次測定。

（五）試劑保存時間較長

作為檢測指示劑用的酶和酶標(biāo)記物，在低溫或干燥條件下相對穩(wěn)定，可保存半年至數(shù)年之久。

（六）自動化程度高

Elisa由于不存在放射性同位素污染，因此，除加待測樣本需要人工操作外，其他各步驟均可用儀器自動化完成。在這種自動化條件下，平均每人每天可完成2000余個樣本的檢測工作。

（七）方法種類多

ELISA技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)，并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑（如SPA、凝集素等）的作用，發(fā)展成為許多新方法。此外，發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因?yàn)椋?，用于ELISA技術(shù)的酶其種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣，有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa，并建立相應(yīng)的ELISA方法。相反，自然界的化學(xué)元素是有限的，放射性同位素的種類更加有限。*，由于酶的多樣性，酶作用底物也有多種多樣，與此相對應(yīng)的生色源或供氫體的種類也有遠(yuǎn)大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?/p>

PCR技術(shù)的定量原理：

擴(kuò)增曲線

在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。

在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。

PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期"。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。