福林酚試劑法測定蛋白質含量

一、原理：

    蛋白質與福林酚試劑反應，生成深藍色復合物。藍色的深淺與蛋白質含量成正比。可用分光光度計于500nm波長下進行測定。與標準曲線對照，而確定蛋白質含量。

二、試劑與材料：

    標準酪蛋白溶液（250ug/ml）：酪蛋白預先用微量凱氏定氮法測定純度，再稱量制備。也可用250ug/ml牛血清蛋白質標準溶液。

   福林酚試劑：吸取試劑A（0.2M氫氧化鈉與4%*溶液等體積混合）100ml，加入試劑B（2%酒石酸鉀鈉溶液與1%五水硫酸銅等體積混合）2ml混合而成。

   福林酚試劑乙：吸取5ml*試劑加入5ml蒸餾水稀釋而成。

   分光光度計、恒溫水浴槽、蛋白質樣品

三、操作方法:

1、標準曲線的制作：

    分別吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml標準溶液于小試管中，分別加進不同量的蒸餾水，補足到1ml。各加入5ml試劑甲，混勻后于室溫下（25℃左右）放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即混勻，于室溫下反應30min。于500nm波長下測定光密度。以吸光值作為縱坐標，蛋白質含量為橫坐標繪制標準曲線。

2、樣品蛋白質含量的測定

    取1ml樣品溶液，加入5ml試劑甲，混勻，于25℃左右放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即搖勻，于25℃左右反應30min，測定吸光值，從標準曲線查出樣品蛋白質含量。