樣品采集和存儲(chǔ)：
　　
　　血清：使用血清分離管（SST）和全血標(biāo)本在室溫下兩小時(shí)或4℃過夜℃，然后離心15分鐘，在1000×g下。刪除上清即可檢測，或分裝和店內(nèi)樣品在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
　　
　　等離子：采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血?jiǎng)Ｔ?-8°C在30分鐘內(nèi)收集離心15分鐘，1000×G。即可檢測，或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
　　
　　檢測程序：
　　
　　在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)來測定一式兩份。
　　
　　1。準(zhǔn)備好所有試劑，工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。
　　
　　2。請(qǐng)確定井?dāng)?shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表
　　
　　。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí)，在37℃下一盤布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測。
　　
　　4。每孔中取出的液體，不洗。
　　
　　5。向每孔中加入100μl*抗體（1倍）。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí)，在37℃下（*抗體（1X）可能會(huì)出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
　　
　　6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對(duì)干凈的紙巾。
　　
　　7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí)，在37℃下
　　
　　8。重復(fù)的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
　　
　　9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
　　
　　10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板，以確保充分混合。
　　
　　11。在5分鐘內(nèi)，設(shè)置至450nm，使用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會(huì)比較高，不太準(zhǔn)確。
　　
　　計(jì)算結(jié)果：
　　
　　建議使用專業(yè)的軟“曲線專家1.3”的標(biāo)準(zhǔn)曲線，這可以從我們的下載。
　　
　　平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品的重復(fù)讀數(shù)和平均減去零標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)密度。
　　
　　標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過減少使用能產(chǎn)生四參數(shù)邏輯（4-PL）的曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件的數(shù)據(jù)。作為一種替代方法，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)在y-軸的濃度通過繪制在x-軸為每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度，并繪制一個(gè)通過在曲線圖上的點(diǎn)的*擬合曲線。該數(shù)據(jù)可以通過繪制的FGF6濃度與日志的OD值和*擬合直線的日志，可以通過回歸分析確定線性化。此過程會(huì)產(chǎn)生足夠的，但不太的適合的數(shù)據(jù)。
　　
　　如果已稀釋的樣品，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的濃度必須乘以稀釋因子。

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