層析柱規格 & @- q1 P( c' }* d			凝膠的規格和用量（ g ）
直徑（ cm）	高（ cm）	容量（ ml ） & L) Q+ ^/ `" i	G25 1 g. l% A5 @& s4 m" _0 ^* C	G50 , k3 L) X! ?% Y- _. ?* A; f	G100 0 K" k" G" q. ?: W+ ~ n	G200
0.9	15 ; N7 d) E3 u$ \|8 t, d6 b$ R( x7 H8 {	9.5	2.5	1	0.6 ( c, i" m, x; i2 p$ I# C3 B	0.3
0.9	30 / p5 J5 L+ x, [& r+ A! R" T	19 " M! z+ a* E' R0 Q6 b5 j	5 $	2	1.2	0.6 '
0.9	60 2 e$ x7 x+ H: s, {	38 . U: R7 D- Q8 _	10	4 $ V/ ?- `1 G" \|( F, \|	2.5	1.2
1.6 $ \6 T# E! b5 r. J6 ^9 y" n	20	40	10 . Y8 s- V7 V) N/ d	4 7 @) o3 u$ u" g$ y	2.5 + v, _1 z( R# {, V& Y) Y, N# j7 ~	1.2
1.6	40 2 v2 G' J+ w$ {- O	80	20	8 9 X. k" q' }, L4 e; ?* n0 {	5.0 ( O# B$ D/ }2 F6 \) U! @	2.4 7 Q! `# r/ Q) _7 H# \
1.6	70		35	14	9.0 . m# H$ W4 D0 i7 \|	4.4
1.6	100	200 2 H. \|- [% W5 S9 `& ]	50	20	12.5	6 ( O3 w. n+ J; y
2.6 : T- v; ^) }- f& x	40 2 Y# P! C2 u0 T. b2 ]4 V	210	50	20 1 X7 P" u7 K) Q4 y( R5 c7 ~	12 - ]% Q4 J2 {4 o) ?, C, r$ @	7 1 ~7 y$ p( T; r. ]: C
2.6	70 % c6 E: \|$ H2 ~ ^7 M. f	370 $ s4 u s. f% b1 {0 z8 x	90 y9 f2 k% j& e5 u	35	20	12 8 Y. I: U& Y! _+ m( a7 C+ W
2.6	100 9 a1 X/ v7 o! ]$ j9 Z: l	530 $ Q c8 y1 o' W& g9 Y( s	130 k8 i1 ]5 F: t0 g0 t) A	50 ! D$ q$ f" Q# T: x	30 1 D/ {; c7 k8 ?/ }# ^	17 . l! O6 G0 f, f# U8 k7 `
2.6 $ ]7 o8 l' f- j; ^! W4 r4 z \|	60 1 G6 y* w4 H) x n	1000	250 6 I, V$ G3 m1 \|6 \|' ]	110 1 l0 y& \# `; @2 X	70 ) r2 W; A2 o3 W! [( ]* D: y J) o; [	35

為使粒子均勻一致需進行浮選，即加入凝膠粒子后，輕輕攪拌，靜置20min，傾去沉淀的粒子，如此反復數次即可。

3.裝柱

層析柱的選擇一般根據分離樣品的種類和樣品的數量而定。純化蛋白質時，柱床體積應為樣品體積的25～100倍。去鹽、游離熒光素約為樣品體積的4～10倍。柱太短，影響分離效果。柱長一些，分離效果好，但柱太長，則延長分離時間，樣品也稀釋過度。層析柱的內徑也要選擇適當。內徑過細，會發生“器壁效應"，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內徑和高度應有一定的比例。對于除鹽來說應為1:5～1:25；對于純化蛋白質來說應為1:20～1:100。

4.加樣與洗脫

樣品體積不宜過多，為床體積的1%～5%，zui多不要超過10%。樣品濃度也不宜過大，濃度過大粘度大，分離效果差，一般不超過4%。

洗脫液應與膨脹一致，否則更換溶劑，凝膠體積會發生變化，影響分離效果。洗脫液要有一定的離子強度和pH值。分離血清蛋白常用0.02～0.1Mol/LpH6.9~8.0的PBS液（0.14Mol/LNaCl）和0.1Mol/LpH8.0Tris-HCl緩沖鹽溶液（0.14Mol/LNaCl）。

5.洗脫液收集

利用自動分步收集器收集，并以20%磺基水楊酸測試，當蛋白液下來時，開始分管收集，至無蛋白液為止。

6.凝膠柱的重復使用與保存

當樣品的各組分全部洗脫下來之后，即可加入新的樣品，繼續使用。保存方法有三種：

（1）在液相中保存zui方便，即于凝膠懸液中加入防腐劑（如0.002%洗必泰）或高壓滅菌后4℃保存。此法至少可以保存半年以上。

（2）用完后，以水沖洗，然后用60%~70%酒精液沖洗，凝膠體積縮小，即在半收縮狀態下保存。

（3）不用者，以干燥狀態保存，即水洗凈后，用含乙醇的水洗，逐漸加大乙醇用量，zui后用95%的乙醇洗，可全部去水，再用乙烯去除乙醇，抽濾干，于60℃~80℃干燥后保存。加乙醇時，切忌一上來就用濃乙醇處理，以防結塊。

国产精自产拍久久久久久蜜,亚洲视频在线观看,亚洲小说图片,国产伦精品一区二区三区免.费

凝膠過濾實驗方法

會員登錄

收藏該商鋪

提示