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巨噬細胞功能的檢測

時間:2014-9-9閱讀:788
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(一)炭粒廓清試驗 
正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒,脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒,據此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液),間隔一定時間反復取靜脈血,測定血中炭粒的濃度,根據血流中炭粒被廓清的速度,判斷巨噬細胞的功能。 
(二)吞噬功能的檢測 
巨噬細胞具有較強的吞噬功能,實驗室常用比細菌大的細胞性抗原作為被吞噬顆粒,如雞紅細胞。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆粒抗原混合后,置37℃保溫0.5~1h,其間時加振搖,zui后離心取測定細胞制成涂片,染色鏡檢,分別計數出吞噬百分比和吞噬指數。各實驗室應根據自己的條件建立正常參考值。 
(三)巨噬細胞溶酶體酶的測定 
巨噬細胞富含溶酶體酶,如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、等,測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。 
1.酸磷酸酶的測定 
(1)*法:本法優點是用普通試劑,價格便宜,一般實驗室均有條件做,封片后可較長時間保存,并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結構。缺點是細胞必需固定,而且固定條件要求嚴格,如處理不當酶活性易消失,反應步驟也較多。 
該法基本原理是在適當的酶性條件下,巨噬細胞內的酸性磷酸酶能使β水解成磷酸鹽后,后者與*反應產生磷酸鉛,而磷酸鉛再與硫酸銨反應則形成黑色硫化鉛,沉積在胞漿內酸所在處,顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據顆粒的數量和粗細不同而分級判斷,顆粒數量少則細的為+,顆粒多而粗的為++,顆粒很多且很粗的為+++。 
(2)偶氮法:本法操作簡便,反應液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后,形成萘酚和磷酸鹽,而萘酚結構中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子,立即與偶氮染料起反應,而產生鮮艷的棕色沉積在酶所在處,缺點是封片后保存時間短。 
2.非特異性酶的測定該酶比較穩定,酶活性喪失較慢,細胞經涂片干燥,置室溫至少可保存半天至一天,因此特別有利于臨床檢驗室采用。 
常用α-萘醋酸法,該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸,萘酚迅速與偶染料結合,形成有色反應物而沉積。 
(四)巨噬細胞促凝血活性測定 
激活巨噬細胞可產生一種與膜結合的凝血活性因子,加速正常血漿的凝固,為此取已經37℃預溫的正常兔血漿和CaC12混合液,加入經粘附單層巨噬細胞的試管中,移置37℃,即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與LPS、腫瘤相關抗原或HbsAg等溫育后,可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩定方便,也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。 
(五)巨噬細胞表面受體的檢測 
 

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