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新生大鼠大腦皮層星形膠質細胞的原代培養

時間:2014-11-3閱讀:644
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將出生2天以內的新生SD大白鼠10只,用75%的酒精浸泡消毒后,采用無菌方法迅速取出大腦,用冷的D-Hanks液清洗并剔除腦膜和血管,取大腦皮質,將碎為1mm3,用0.125%,37ºC消化10分鐘,過濾(200目尼龍濾網),離心(1000rpm 10分鐘)。

去上清,加入DMEM/F12*培養基(其中含10%胎牛血清,10%馬血清,L-2mmol/L,100u/ml,100μg/ml)制成細胞懸液。

計數后按5×105/cm2接種于培養瓶。貼附30min后,轉移細胞懸液至新瓶中,加入DMEM/F12*培養基,在37ºC, 5%CO2培養箱中培養9天(每3天更換培養液一次),第9天將培養瓶置于恒溫旋轉搖床上37ºC, 240rpm,搖18小時,去掉懸浮的細胞,用D-Hanks液清洗3次,進行傳代培養即得純化的星形膠質細胞。

經免疫細胞化學法檢測,98%以上的細胞GFAP免疫反應為陽性。 

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