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上海士鋒生物科技有限公司
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抗體
生物試劑
細胞
菌株
血清
細胞分離試劑
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BCA Protein Assay Kit使用說明書

時間:2013-8-16閱讀:631
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實驗原理:

BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量:在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+(biuret reaction)。BCA與Cu1+結合形成穩定的紫藍色復合物,在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質濃度成正比,據此可測定蛋白質濃度。

產品特點

1.步驟簡單,45分鐘內完成測定,比經典的Lowry法快4倍而且更加方便。

2.靈敏度高,檢測濃度下限達到25μg/ml,zui小檢測蛋白量達到0.5μg,待測樣品體積為1-20μl 。

3.BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學物質的影響,可以兼容樣品中高達5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。

4.在20-2000μg/ml濃度范圍內有良好的線性關系。

5. 檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍法蛋白定量。

實驗步驟:

1. 先將solutionA 搖晃混勻,根據樣品數量,按50體積solution A加1體積solutionB試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻。BCA工作液在24小時內穩定。

2.稀釋標準品:*溶解蛋白質標準品(5mg/mlBSA,-20℃保存)取10微升用PBS稀釋至100微升(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為 0.5mg/ml。

將稀釋后的標準品(0.5mg/ml)按0, 2, 4,6,8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板的蛋白標準品孔中,加標準品稀釋液補足到20微升。

3.加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中,加標準品稀釋液不足道20ul。

即:將蛋白質樣品作適當稀釋(多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋。

4.在 各孔中加入200微升BCA工作液,這時使用加樣槍輕柔吹打,將其中液體混勻,這時請注意,盡量小一點力氣輕柔一點,不要弄出很多氣泡,這樣會影響讀數),然后再37℃室內放置30-60min。將液體冷卻至室溫,在酶標儀上測定A562nm,或540-590nm之間的波長的吸光值,zui后可根據標準曲線計算出蛋白質的濃度,為樣品蛋白質定量。

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