核酸酶保護(hù)分析簡(jiǎn)介

時(shí)間：2016/8/22閱讀：1130

核酸酶保護(hù)法是一種用于生物化學(xué)和遺傳學(xué)識(shí)別個(gè)人在異構(gòu)RNA的提取樣品RNA分子細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。該技術(shù)可以識(shí)別一個(gè)或多個(gè)已知序列的RNA分子，即使在較低的總濃度。提取的RNA先用混合反義 RNA或DNA探針是相輔相成的利益和互補(bǔ)鏈的序列或序列雜交，形成雙鏈RNA(或DNA-RNA的雜交)。.然后將混合物接觸到核糖核酸酶，專(zhuān)門(mén)切割單鏈RNA，但有沒(méi)有活動(dòng)，對(duì)雙鏈RNA。當(dāng)反應(yīng)完成運(yùn)行，容易R(shí)NA地區(qū)退化很短的低聚物或個(gè)別核苷酸 ;尚存的RNA片段，這些增加的反義鏈互補(bǔ)，從而所載利益的順序。

Probe探針

探針準(zhǔn)備克隆基因在矢量控制下以下的推動(dòng)者，SP6中，T7或T3的任何利益的一部分。這些發(fā)起人是*的DNA依賴(lài)的RNA聚合酶zui初從噬菌體特點(diǎn)。探針產(chǎn)生的放射性物質(zhì)，因?yàn)樗鼈兪怯审w外轉(zhuǎn)錄使用放射性UTPs的準(zhǔn)備。無(wú)補(bǔ)的DNA或RNA的切割核酸。當(dāng)探頭是一個(gè)DNA分子， S1核酸當(dāng)探針是RNA，可用于任何單鏈核糖核酸。因此，幸存的基因探針補(bǔ)只需通過(guò)放射自顯影檢測(cè)。

Uses用途

核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)用地圖內(nèi)含子和5'和3'末端的轉(zhuǎn)錄基因區(qū)域。關(guān)于原始細(xì)胞提取物中存在的靶RNA的量，可以得到定量的結(jié)果-如果目標(biāo)是一個(gè)信使RNA ，這可以表明細(xì)胞中的基因的轉(zhuǎn)錄水平。它們也可以用來(lái)檢測(cè)雙鏈RNA的存在，這可能意味著RNA干擾存在。

Northern雜交是一種實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，產(chǎn)生類(lèi)似的信息。它是慢，定量少，但也產(chǎn)生對(duì)靶RNA的大小的準(zhǔn)確信息。核酸保護(hù)法產(chǎn)品由于銷(xiāo)毀非雜交的RNA在核酸消化步驟的初始探頭的大小是有限的。

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