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腺病毒系統重組技術

時間:2015/3/12閱讀:1168
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目前構建重組腺病毒系統的策略,主要有三種

1)體外直接連接(clontech的ADENO-X系統)

2)在細菌中重組的策略(adeasy系統)

3)在293細胞中重組的策略(AdMax系統)

國家人類基因組北方研究中心通過與美國Vector Biolab公司合作開發出了一套不同于以上策略的新的重組腺病毒系統。通過這套系統,實現了重組腺病毒載體構建,包裝的高通量化。在不到一年的時間里,成功構建,包裝了500多個腺病毒。通過對穿梭載體,骨架載體,包裝細胞系的改進,提高了病毒的滴度,比目前其它腺病毒系統得到的滴度都高。而且可以包裝比較大的有毒性作用的基因。這套系統的建立無疑是對國內基因治療領域的促進,提高了科研效率,降低了科研成本。

這套系統的解決了目前重組腺病毒系統的很多技術難題:

1. 提高了病毒的滴度。一次大規模擴增,純化得到的病毒量可以滿足上百只裸鼠實驗或幾十只大鼠實驗。

2. 可以包裝任何有細胞毒性的基因。針對腫瘤的基因治療經常會選擇有細胞毒性的凋亡相關基因來實現殺傷腫瘤細胞的目的。這套系統解決了這樣的難題。

3. 可以包裝內部有PacI位點的插入基因。大多系統都選擇PacI酶切線性化viral DNA,如果基因內部有PacI位點往往給研究者帶來困難。

4. 縮短了重組腺病毒載體的構建周期,而且可以開展大規模的載體構建,病毒包裝項目。為研究者開展后續的實驗項目或者進行更大,更具規模化的科研項目節約了時間和成本。

5. 滴度測定更快,更準確。一般的滴度測定方法,兩次重復實驗都會有很大的偏差,該系統優化了滴度測定的條件,使得滴度測定工作只需要三天時間,兩次重復滴度測定偏差不超過40%。

6. 的包裝成功率。穿梭載體系統命名為pDual系列穿梭載體,Dual代表可與兩套病毒骨架載體兼容,用其中一套的包裝成功率為99%以上,在包裝500個腺病毒過程中只有一個沒有包裝成功。剩下的1%不好包的,不用再重新構建穿梭載體就可以馬上換另一套系統。這樣降低了風險,節省了客戶的時間。

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