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轉管及轉瓶培養

時間:2014/11/20閱讀:764
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轉管培養法(roller tube culture)是Gey 提出的,實驗室常用,為了擴大細胞產量,將試管改用轉瓶,故稱轉瓶培養,其培養方法是一樣的,試管或轉瓶固定在支加上,傾斜度為5°~10°左右,或將轉瓶放在一排排轉軸之間,使轉瓶隨著轉軸以每小時6~12 轉緩慢轉動。細胞貼附于玻璃壁四周,細胞貼壁和生長只有一個表面面積,經轉動一方面使培養液流動,利于細胞吸收營養和進行代謝,一方面使細胞有機會接觸氣體,有利于細胞呼吸和發生氧化還原作用,有利于細胞生長繁殖。培養瓶(管)內保持有相當大的上方空間,以維持合適的氧和pH 水平,通過轉動可使細胞交替接觸培養液和空氣,營養可被充分利用。若需增加細胞產量,除可在增加轉瓶的數量和容積外,使瓶直徑盡可能小,此時表面面積可因直徑或長度的倍增而成倍增加。

轉瓶培養也可使用灌注培養系統,因此系統需要錯綜復雜回旋的可連續供應的管道進入瓶內,這是一種昂貴的選擇。

[實驗程序]:

本程序是在1400cm2(23×12cm)一次性塑料瓶上使用的(Corning 或Becton Dickinson)程序。

1、加入300ml生產培養液于轉瓶中。

2、加入1.5×107細胞。

3、在37℃下,以12轉/小時,轉動2小時,使細胞均勻貼壁。

4、減少轉動速度至5 轉/小時并連續培養。

5、在倒置顯微鏡下使用長焦距物鏡檢查細胞。

6、在細胞生長至明顯匯合時(5~6天),移出培養液,加入0.25%,并滾動轉瓶以收獲細胞。洗去,加入新鮮培養基,可轉入擴大再培養。為了增加表面積,有人將轉瓶表面制成帶皺紋的表面或插入多層隔板。以增加表面積。

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