本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人17-酮類固醇（17-KS）水平。用純化的人17-酮類固醇（17-KS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入17-酮類固醇（17-KS），再與HRP標記的17-酮類固醇（17-KS）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的17-酮類固醇（17-KS）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人17-酮類固醇（17-KS）濃度。
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