當前位置：上海金穗生物科技有限公司>>公司動態>>從cDNA*鏈中擴增VH和VL基因
[方法]
1．在0．5ml微量離心管中配制50ul PCR反應混合液， 包括：
● Millipore水， 31.5ul
● 10×VentDNA聚合酶緩沖液，5．0ul
● 20×dNTP， 2．5ul
● 正向引物，2．0ul
● 反向引物，2．0ul
● 來自實驗方案13．2的cDNA反應混合液，5．0ul
2．在熱循環儀格內加熱反應體系到94℃5分鐘。如果沒有加熱蓋，則滴加1滴輕質礦物油覆蓋反應液。
3．加入2．0ul（2單位）VentDNA聚合酶。
4．以94℃1分鐘、60℃1分鐘、?2℃1分鐘的條件共循環30次，擴增V基因。
5．用0．5％瓊脂糖凝膠電泳純化PCR片段；按照廠家說明書， 用Geneclean試劑盒從膠中提取目的組分。將每種產物重懸于20ul水中。在1％瓊脂糖凝膠中，與已知大小和濃度的標準對照品比較，測定目的DNA濃度。
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