在做ELISA試劑盒實驗過程中，難免會遇到各種不同的問題，比如標準曲線不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽性，實驗的重復性不好等等。

ELISA試劑盒曲線問題：

 1.OD值不正常試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃溫度控制不好，控制正確溫度孵育時間不準確，控制孵育時間洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干陽光直射，對著風直接吹，避風避酶標儀的波長錯誤，酶標儀的波長450nm抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體水質問題，用娃哈哈礦泉水代替

2.白   板

洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體

3.無 梯 度

標準品也污染，換標準品點板OD值不正常，控制溫度時間在做一次人為點板，不要點板

4.線 性 不 好

OD值不正常，控制溫度時間在做一次ELISA試劑盒回收率

1.空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本，換陰性樣本做回收率空白管在實驗中被污染，實驗中防止交叉污染

水質原因用，娃哈哈礦泉水代替

2.偏  高

添加量不準確，的添加量添加濃度不適合，添加合適的濃度取液吹干量多，準確的取液吹干取到其它相層液體，取需用相吹干復溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復溶液

3.偏  低

添加量不準確，的添加量添加濃度不適合，添加合適的濃度取液吹干量少，準確的取液吹干復溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復溶液

假陰、陽性

1，水質原因：點復溶液驗證，用娃哈哈礦泉水代替

2，實驗操作原因吸取到其它相吹干，準確的取液吹干離心不*，延長離心時間

樣本的污染，更換樣本乳化未處理*，溫浴（70℃）處理乳化現象

3，儀器試劑原因

離心管未清洗干凈，ELISA試劑盒正確的洗滌器具有機溶劑的影響，做試劑空白看影響結果

4，衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質）,更換衍生化試劑

5，與曲線好壞相關,，保證曲線的正常