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ELISA競爭抑制法普遍存在的操作問題

時間：2012/3/11閱讀：1097

兩對半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測，而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。

而競爭抑制法的原理：酶標抗體與樣本抗體在同樣的體系中，與固相抗原競爭結合是等比關系。原論上講，應該先將樣本與酶標抗體先行混勻，然后加入反應也進行。但實際工作中并非如此，都是分開加入反應孔。這樣會造成先加入的先結合，與后加入者并不是公平的關系，因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長，且溫度高的情況下，對結果有很大的影響。

第二軍醫大學長海醫院對此造成的影響進行了研究。將陰性標本94份并用生理鹽水進行1：30稀釋，在加入標本后按下表時間放置后再加入酶標抗體，然后檢測結果如下：

放置時間（min）	陰性標本數	臨界值－標本A450nm值			假陽性率（%）
放置時間（min）	陰性標本數	<0.3	0.3~0.7	>0.7	假陽性率（%）
0	75	10	3	6	0
2	68	13	7	6	7.4
5	65	15	8	6	10.6
10	56	16	12	10	20.2
20	38	18	17	21	39.3
30	21	12	18	43	57.4

從上表可以看出，如果同時加入標本與酶標抗體，沒出現假陽性現象。2分鐘后再加入酶標抗體，由于標本比酶標抗體先結合了兩分鐘，因此出現了7.4%的假陽性。30分鐘后再加，假陽性高達57.4%。因此建議競爭抑制法的項目，加十個樣本后立即加酶標抗體，這樣對檢測結果沒有影響。

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