15249211585
膜聯蛋白V結合物在Ca2+存在下與凋亡細胞表面上的PS結合，它也可以通過壞死細胞膜或死細胞并與細胞內部的PS結合。 因此，我們建議將細胞不可滲透的核染色與膜聯蛋白V結合物結合使用，以區分死細胞和凋亡細胞。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的Annexin V-mFluor Violet 450標記探針。
光譜：
光譜性質
吸光度(nm)： 406
校正因子(260海里)： 0.338
校正因子(280海里)： 0.078
消光系數(cm 1米1)：350001
激發： 406 (nm)
發射(nm)： 445
量子產率： 0.811
實驗方案
分析方案
概述
用測試化合物（200μL/樣品）制備細胞
添加Annexin V結合物測定溶液
室溫孵育30-60分鐘
用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析
1.用膜聯蛋白V綴合物制備和孵育細胞：
1.1制備膜聯蛋白V結合測定緩沖液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。
1.2用測試化合物處理細胞一段所需的時間（用星形孢菌素處理的Jurkat細胞4-6小時）以誘導細胞凋亡。
1.3離心細胞，得到1-5×105個細胞/管。
1.4將細胞重懸于200μL膜聯蛋白V結合測定緩沖液中（來自步驟1.1）。
1.5在細胞中加入2μL膜聯蛋白V結合物。
可選：在細胞內加入死細胞染色劑如碘化丙錠，用于壞死細胞。
1.6在室溫下孵育30至60分鐘，避光。
1.7在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前，加入300μL膜聯蛋白V結合測定緩沖液（來自步驟1.1）以增加體積（參見下面的步驟1.8）。
1.8使用流式細胞儀或熒光顯微鏡監測熒光強度（參見下面的步驟2或3）。
2.使用流式細胞儀分析：
通過使用具有適當過濾器的流式細胞儀來量化膜聯蛋白V綴合物。
注意：粘附細胞上的膜聯蛋白V結合流式細胞術分析未經常檢測，因為在細胞分離或收獲期間可能發生特定的膜損傷。 然而，Casiola-Rosen等人先前報道了利用膜聯蛋白V對貼壁細胞類型進行流式細胞術的方法。 和van Engelend等人（見參考文獻1和2）。
3.使用熒光顯微鏡分析：
3.1移取步驟1.6的細胞懸液，用膜聯蛋白V結合測定緩沖液（來自步驟1.1）沖洗1-2次，然后用膜聯蛋白V結合測定緩沖液（來自步驟1.1）重懸細胞。 將細胞添加到蓋有玻璃蓋玻片的載玻片上。
注意：對于粘附細胞，建議直接在蓋玻片上生長細胞。 與膜聯蛋白V綴合物孵育（步驟1.6）后，用膜聯蛋白V結合測定緩沖液（來自步驟1.1）沖洗1-2次，并將膜聯蛋白V結合測定緩沖液（來自步驟1.1）加回到蓋玻片中。 在玻璃載玻片上翻轉蓋玻片并觀察細胞。 在與膜聯蛋白V綴合物孵育后，細胞也可以在2％甲醛中固定，并在顯微鏡下觀察。
3.2在熒光顯微鏡下用適當的濾光片分析膜聯蛋白V綴合物的凋亡細胞
圖1所示。膜聯蛋白的檢測綁定活動V-mFluor™紫450共軛Jurkat細胞磷脂酰絲*酸。Jurkat細胞治療沒有(綠色)或1μM staurosporine(紅色)為4小時37oC,然后貼上膜聯蛋白V-mFluor™紫450共軛30分鐘。熒光強度測量使用究NovoCyte流式細胞分析儀在太平洋藍色通道。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供，信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責，環保在線對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示：為規避購買風險，建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
