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西安百螢生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第5年

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百螢 Cell Meter PE Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 適用于流式細(xì)胞儀

時(shí)間:2023/5/15閱讀:57
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1. 百螢 Cell Meter PE Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒概述 

Cell Meter  PE-Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡的試劑盒,膜聯(lián)蛋白V可以與包括PE的熒光染料結(jié)合。該染料保留了其對(duì)磷脂酰*氨酸(PS)的高親和力,因此可用作流式細(xì)胞術(shù)分析正在經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的細(xì)胞的敏感探針。由于PS的外化發(fā)生在細(xì)胞凋亡的早期階段,PE膜聯(lián)蛋白V染色可以比基于核變化(例如DNA片段化)的測(cè)定更早地鑒定細(xì)胞凋亡。 PE膜聯(lián)蛋白V染色先于膜完整性的喪失,膜完整性伴隨由凋亡或壞死過(guò)程導(dǎo)致的最新細(xì)胞死亡階段。因此,用PE膜聯(lián)蛋白V染色通常與碘化丙啶(PI)或7-氨基 - 放線菌素(7-AAD)等活體染料結(jié)合使用,使研究者能夠鑒別早期凋亡細(xì)胞(7-AAD陰性,PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性)。具有完整膜的存活細(xì)胞排除7-AAD,而死亡和受損細(xì)胞的膜可透過(guò)7-AAD。例如,被認(rèn)為存活的細(xì)胞既是PE膜聯(lián)蛋白V也是7-AAD陰性的,而處于早期凋亡的細(xì)胞是PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性和7-AAD陰性,而處于晚期凋亡或已經(jīng)死亡的細(xì)胞都是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性。該測(cè)定法不區(qū)分經(jīng)歷凋亡性死亡的細(xì)胞與因壞死性通路而死亡的細(xì)胞,因?yàn)樵谌我磺闆r下,死亡細(xì)胞都將用PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色。然而,當(dāng)隨著時(shí)間測(cè)量細(xì)胞凋亡時(shí),可以經(jīng)常從PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性(可行的,或不可測(cè)量的細(xì)胞凋亡)追蹤細(xì)胞至PE膜聯(lián)蛋白V陽(yáng)性和7-AAD陰性(早期凋亡,膜完整性存在),最后是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽(yáng)性(末期凋亡和死亡)。細(xì)胞通過(guò)這三個(gè)階段的運(yùn)動(dòng)表明細(xì)胞凋亡。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter  PE-Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。

 

2. 百螢 Cell Meter PE Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒適用儀器

流式細(xì)胞儀

E  x:       488nm or 561nm

E  m:       575/26nm

通道:       PE通道

 

3. 百螢 Cell Meter PE Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)方案

 

簡(jiǎn)要概述

(1)用測(cè)試化合物(200μL/樣品)制備細(xì)胞
(2)添加RPE-膜聯(lián)蛋白V測(cè)定溶液
(3)在室溫下孵育20-60分鐘
(4)使用FL2通道(Ex / Em = 488/585 nm)用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

儲(chǔ)備溶液配制

    除非另有說(shuō)明,否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣,并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
 RPE-Annexin V原液(100X):
將含有0.2%BSA的200μLPBS加入到RPE-膜聯(lián)蛋白V(組分A)的小瓶中以制備100X RPE-膜聯(lián)蛋白V儲(chǔ)備溶液。 注意:將重構(gòu)的100X RPE-Annexin V儲(chǔ)備溶液儲(chǔ)存在4°C。

操作步驟

A.用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間(用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞4-6小時(shí))以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意:膜粘附細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V流式細(xì)胞術(shù)分析未經(jīng)常檢測(cè),因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲期間可能發(fā)生特定的膜損傷。然而,Casiola-Rosen等人先前報(bào)道了利用膜聯(lián)蛋白V對(duì)貼壁細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法。

B.離心細(xì)胞,得到1-5×105個(gè)細(xì)胞/管。

C.將細(xì)胞重懸于200μL測(cè)定緩沖液(組分B)中。

D.向細(xì)胞中加入2μL100XRPE-膜聯(lián)蛋白V原液。

E.可選:為壞死細(xì)胞添加2μL100XNuclear Red DCS(成分C)。

F在室溫下孵育20至60分鐘,避光。

G可選:在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前,添加200至300μL的測(cè)定緩沖液(組分B)以增加體積。

H.使用具有FL2通道的流式細(xì)胞儀(Ex / Em = 488 / 585nm)監(jiān)測(cè)RPE-膜聯(lián)蛋白V的熒光強(qiáng)度。當(dāng)將Nuclear Red DCS添加到細(xì)胞中時(shí),使用FL4通道測(cè)量細(xì)胞活力。

4.百螢 Cell Meter PE Annexin V細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒數(shù)據(jù)分析

在活的非凋亡細(xì)胞中,RPE-模聯(lián)蛋白V檢測(cè)非誘導(dǎo)細(xì)胞中的先天性細(xì)胞凋亡,其通常為所以細(xì)胞的2-6%。在凋亡細(xì)胞中,RPE-模聯(lián)蛋白V與磷脂酰*氨酸結(jié)合,磷脂酰*氨酸位于細(xì)胞膜的外葉上,因此導(dǎo)致染色強(qiáng)度增加。

圖片1.png

1.使用Cell Meter RPE-膜聯(lián)蛋白V結(jié)合細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)RPE-膜聯(lián)蛋白V對(duì)Jurkat細(xì)胞中磷脂酰*氨酸的結(jié)合活性。 將Jurkat細(xì)胞在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中在沒(méi)有(藍(lán)色)或1μM星形孢菌素(紅色)的情況下處理4-5小時(shí),然后用RPE-膜聯(lián)蛋白V染色30分鐘。 使用FACSCalibur(Becton Dickinson)流式細(xì)胞儀使用FL2通道測(cè)量RPE-膜聯(lián)蛋白V的熒光強(qiáng)度。


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