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小鼠檢測試劑盒原理
利用離心柱內硅基質膜提取樣品總 RNA,在高效反轉錄酶的作用下,以 RNA 為模板,以 引物為起點合成與 RNA 模板互補的 cDNA 鏈。在熱啟動 Taq 酶的作用下,經高溫變性、中溫退火 及延伸的循環,使特異 DN段的拷貝數放大一倍,經熒光素標記的探針與擴增的 DNA 雜交,利 用 Taq 聚合酶的 5'→3'外切活性,使熒光探針的報告基團與淬滅基團分離,發出特異性熒光信號,利 用熒光 PCR 儀檢測特異性熒光信號,根據樣品 Ct 值的大小及擴增曲線的形成情況判定結果。
小鼠檢測試劑盒注意事項:
1.所有接觸病料的物品均應合理處置,以免污染實驗室。
2.PCR 整個試驗分配液區、模板提取區、擴增區。流程順序為配液區→模板提取區→擴增區。嚴 禁器材和試劑倒流。
3.所有試劑應在規定的溫度儲存。-20℃保存的各試劑管使用前應*融化,8000 rpm 離心 15 s, 使液體全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液體時移液器吸頭盡量在液體表面層吸取,使用后立 即放回-20 ℃。
4.在 RNA 提取過程中,避免 RNA 酶污染,盡量縮短操作時間。
5.注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑,試劑盒之間的成分不要混用。
6.嚴格遵守操作說明可以獲得的結果。操作過程中移液、定時等全部過程必須精確。
7.反應體系應在特定配液區或者超凈工作臺中配制,整個實驗過程嚴格控制污染。
8.反復凍融試劑將減低檢測靈敏度,本試劑盒應在 3 次內用完,請嚴格按試劑盒說明書操作。
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