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標準品原理:
本試劑盒系由預包被豬瘟病毒重組E2蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。
標準品保存方法:
一、防蛻變:
1.防氧化:亞硫酸鈉、、均易被氧化,瓶口應涂臘。
2.防碳酸化:硅酸鈉、過氧化鈉、苛性堿均易吸收二氧化碳,應該涂臘。
3.防風化:晶體碳酸鈉、晶體硫酸銅應進行臘封,存放在地下室中。
4.防分解:碳酸氫銨、濃硝酸受熱易分解,涂臘后,存放在地下室中。
5.活性炭能吸附多種氣體而蛻變,(木炭亦同),應放在干燥器中。
6.黃磷遇空氣易自燃,永遠保存水中,每15天查水一次:磷試劑瓶中加水、置于有水水糟中,上加鐘罩關閉。
7.鉀、鈉保存在火油中。
8.溶液中滴幾滴稀硫酸,加入過量細鐵粉,進行臘封。
9.葡萄糖溶液容易霉變,稍加幾滴甲醛即可保存。
10.甲醛易聚合,應開瓶后立即加少數甲醇;乙醛則加乙醇。
二、防光:
1.,濃硝酸及大部份有機藥品應該放在棕色瓶中。
2.硝酸鹽存放在地下室中既防熱,又防光、防火還能防震。
3.有機試劑櫥窗一概用黑漆涂染。
4.實驗室用色布窗布,內紅外黑雙層。
標準品操作流程:
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作,各區實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區,并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
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