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ELISA試劑盒實驗原理與注意事項

時間:2020/9/2閱讀:761
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ELISA試劑盒實驗原理:

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠總蛋白(TP)水平。用純化的小鼠總蛋白(TP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總蛋白(TP),再與HRP標記的總蛋白(TP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體ELISA試劑盒復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總蛋白(TP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠總蛋白(TP)濃度。

ELISA試劑盒注意事項:

1.ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做ELISA試劑盒標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔di一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和ELISA試劑盒各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

 

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