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抗體無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反復凍融,收到抗體后請根據實驗的需要,對抗體進行分裝,避免同一管抗體反復凍融(反復凍融會導致抗體空間結構變 性,導致多聚體形成,從而降低抗體的結合能力)。抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果,如果抗體保存得當,抗體活性大部分都可以維持數年。 請謹記,無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。
1. 收到抗體后,請務必在4℃,12000rpm,離心3分鐘,(無論是液體還是凍干粉狀態),再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul,請延長 離心時間至5分鐘,以保證全部抗體均離心下來)。抗體一般使用特制的儲存管,只有在12000rpm離心3分鐘,才能將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下 來(即使是在10000rpm離心也會離心不wan 全,導致出現抗體的量不足的現象)。
2. 對于ProSci大部分抗體,比較合適的保存方式是,分裝后保存在-20℃或者-80℃。
(1)對絕大多數抗體來說,保存在-20℃就 wan 全足夠了,沒有任何證據顯示保存在-80℃會更好。
(2)分裝可以zui 大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。
(3)分裝的量以一次實驗用完為好,最少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發以及管壁吸附的影響。
(4)復融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4℃,避免再凍起來。
(5)抗體工作液應該當天配制當天用完,4℃保存盡量不要超過1天。
(6)絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中,將抗體保存在冰箱里層,避免溫度變化造成反復凍融。
3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。
4. 大部分抗體的運輸條件:一般的運輸過程需要1~2周的時間,所以是在低溫4℃的條件下來完成的。
4℃運輸最主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害(如果使用干冰運輸,那么收到時抗體是凍起來的,為了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過程),所以運輸過程中絕對避免干冰運輸。
關于疊氮化na(sodium azide)的使用:
為了防止微生物污染,疊氮化na經常被加入到抗體中(終濃度0.02% (w/v))。ProSci的絕大部分抗體已經含有了0.02%-0.05%的疊氮化na,在說明書的儲存緩沖液中有標明。
注:疊氮化na的去除方式
可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除,IgG的分子量是150kDa(IgM約600kDa);疊氮化na的分子量只有65Da,使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將疊氮化na從抗體中去除。
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