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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產品： 氣相色譜、液相色譜、氣質聯用儀、液質聯用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計 |
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使用超液相色譜/三重串聯四桿質譜開發高通量生物分析方法
2022-12-6 閱讀(127)
摘要：生物分析域的快速 LC/MS/MS液相色譜 方法開發受多個因素影響，是一項艱巨的任務。為了在加快分析速度的同時保持高靈敏度，目標分析物不應該在受離子抑制影響的色譜保留范圍內洗脫。質譜儀的掃描速度必須足夠快，以獲得足夠多的數據點來明確表征由亞2µm 色譜柱分離得到的窄色譜峰。在典型的快速液相色譜條件下，產生的反壓會接近甚至高于目液相色譜系統（壓力限 ≤ 400bar（5800psig））的反壓限值。在本應用摘要中，我們采用 Agilent 1290 Infinity LC 系統與 Agilent 6460 三重串聯四桿質譜儀聯用，采用熱梯度聚焦 ESI（安捷倫噴射流技術，AJS）和添加了阿pu唑侖的人血漿基質（2nM 至 5000nM，相當于 0.06ng/mL 至 1544ng/mL）簡化高通量生物分析方法的開發。100µL 的加標血漿樣品采用三倍體積乙腈沉淀并離心。200µL 上清液用三倍體積 0.1% 甲酸（FA）水溶液稀釋。每個樣本重復進樣三次。采用通用離子源數據對 AJS 技術和傳統直角 ESI 技術進行了比較。Agilent 1290 Infinity LC 三重串聯四桿 MS/MS 系統，高流速可達 2mL/min，高壓力可達 1200bar，駐留時間低至 1-2ms，相應地，分析時間不超過 0.5min，并且不會犧牲定量數據的質量。安捷倫的超高壓快速高分離度色譜柱（RRHD）的柱效更高，可得到更窄的色譜峰，被分析物的色譜峰峰高顯著增加，與基質組分分離，可提高被分析物的響應（靈敏度）。
儀器條件Agilent 1290 Infinity LC MS/MS 系統：Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統，包括帶集成脫氣機的二元泵，帶溫控系統的自動進樣器和柱溫箱。Agilent 6460A 三重串聯四桿 LC/MS 帶 AJS 技術離子源或傳統的直角 ESI 源。
