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上海斯邁歐分析儀器有限公司
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液質聯用儀分析雞肉中的農藥殘留
2022-6-5 閱讀(855)
摘要：本應用簡報描述了使用快速、簡便、經濟、高效、耐用和安全 (QuEChERS) 的 AOAC 樣品制備方法來萃取和凈化雞肉中多種農藥類型典型代表的 12 種農藥殘留。早期的 AOAC方法采用了在水/乙腈緩沖系統中進行的初萃取、加入鹽分后的萃取/分離步驟，以及使用分散固相萃取 (dispersive SPE) 的凈化步驟。然后通過液相色譜與在陽離子多反應監測(MRM) 模式下操作的電噴霧離子化串聯質譜儀 (LC/ESI/MS/MS) 進行聯用，來確定雞肉提取物中是否存在目標農藥?；厥章蕦嶒灥募訕怂綖?10 和 50 ng/g。平均回收率在76% 至 107% 范圍內，相對標準偏差 RSD 低于 10%。
前言AOAC QuEChERS 方法廣泛應用于食品中的農藥分析 [1,2]。本方法采用乙腈提取，然后利用無水 (MgSO4) 將樣品中的水進行鹽析分離，以醋酸鹽緩沖液誘導分離。而凈化方面，本應用選擇了其他食品方法中所用的 Agilent 分散 SPE 試劑盒。這類試劑盒的樣品容量為 8 mL，含 900 mg MgSO4，在每毫升乙腈提取物中加入 150 mg C18。在本研究中，分析 12 種農藥以便于對適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒和Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒的性能進行評估。該方法已通過分析物回收率和重現性驗證。表 1 所示為雞肉中農藥的化學和法規信息。
實驗部分所有試劑和溶劑均為 HPLC液相色譜儀 或分析純級。甲醇 (MeOH) 和乙腈(ACN) 購自 Honeywell（美國密歇根州馬斯基根）。甲酸 (FA) 購自 Fluka（德國施泰因海姆）。農藥標準品購自西格瑪奧德里奇公司（美國密蘇里州圣路易斯）。內標物（磷酸三苯酯，TPP）來自安捷倫科技公司（美國特拉華州威爾明頓）。標準品和內標 (IS) 儲備液（除多菌靈為 0.5 mg/mL 之外，其它均為2.0 mg/mL）分別用含甲醇和 0.1% FA 的乙腈或二甲基亞砜制備，并在 –20 °C 下保存。兩份濃度為 0.5 和 2.5 µg/mL 的 QC 加標溶液用含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水每日現場制備。將等量的 2.5 µg/mLTPP 加入到含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水中作為 IS 加標溶液。
儀器和材料• Agilent 1200 Infinity 系列• 電噴霧離子化 Agilent 6460 三重四極桿 LC/MS 系統• Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒（部件號 5982-5755CH）• 適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 試劑盒（部件號 5982-4956CH）• Eppendorf 微量離心管（Brinkmann 儀器，美國紐約州韋斯特伯里）• 飛鴿離心機（安亭科學儀器，中國上海）
HPLC 條件色譜柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18，2.1 × 100 mm，2.7 µm（部件號 695775-902）流動相： A：0.1% 甲酸 (FA) 的水溶液B：0.1% FA 的乙腈溶液進樣量： 5 µL流速： 0.4 mL/min梯度： 時間 (min) %B0 51 53 507 908 908.2 59 5溫度： 30 °C后運行： 2 min總運行時間： 11 minMS 條件氣體溫度： 350 °C氣體流速： 10 L/min霧化器壓力： 40 psi毛細管電壓： 3500 V農藥在正離子模式下進行監測。分析物的其他條件見表 2。
樣品前處理雞肉購自當地市場。將肉切成小塊，置于潔凈的塑料袋中，并在–20 °C 下冷凍過夜。第二天只取需用量的冷凍雞肉，并充分混勻。將樣品*粉碎，制得均質樣品。確保所得的最終樣品中無明顯可見的雞肉塊。萃取/分離取 5 g (± 0.1 g) 均質樣品放入 50 mL 離心管中。采用 100 µL QC加標溶液制備 QC 樣品。在對照空白樣品外的其余所有樣品中均加入內標加標溶液 (100 µL)，制備內標濃度為 50 ng/g 的樣品溶液。蓋上離心管，渦旋振蕩 1 min。利用分液器向每個離心管中加入等量的水 10 mL。蓋上離心管，渦旋振蕩 1 min。利用分液器向每個離心管中加入等量的 15 mL 乙腈（含 0.1% 乙酸）。蓋上離心管，手動振搖 1 min。向每個離心管中直接加入 Bond ElutQuEChERS AOAC 萃取鹽包（含無水6 g 和醋酸鈉 1.5 g）。蓋緊離心管，手動劇烈振搖 20 s，確保溶劑與所有樣品充分混合，結晶聚集物*打碎。最后將樣品離心管以 4000 rpm 的轉速離心 5 min。
分散固相萃取的凈化從離心管中吸取 8mL乙腈上清液，移至 15mLBond ElutQuEChERSAOAC 分散 SPE 管。分散 SPE 管中含有 900 mg 無水150 mg C18。將離心管蓋緊，渦旋振蕩 1 min。然后用標準離心機以 4000 rpm 的轉速離心 5 min。取萃取液 2 mL 轉移至試管中，并在低于 40 °C 的溫度下于氮氣環境中干燥。最終殘留物用乙腈:水(1:9) 溶解并定容至 1 mL。然后將殘留物通過 0.2 µm 安捷倫優級針頭過濾器進行過濾（部件號 5190-5106）并用 LC/MS/MS 分析。
結果與討論本研究根據建議將同樣適用于其他食品方法的 AOAC 分散 SPE 試劑盒應用于雞肉分析。由于 LC/MS/MS 具有強大的選擇性，空白基質的 MRM 色譜圖中未顯示目標分析物的干擾峰。圖 1 和圖 2 中所示為空白基質（內標加標）和分散 SPE 方法處理后的10 ng/g 雞肉提取物的 LC/MS/MS 色譜圖。回收率和重現性在粉碎的樣品中加入農藥標準品來評估回收率和重現性，農藥標準品濃度水平為 10 和 50 ng/g。各濃度水平重復分析 6 次?；厥章屎椭噩F性（以 RSD 表示）數據見表 4。由數據可知，所得的12 種農藥的回收率和精密度良好。
結論適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒和分散 SPE 試劑盒為雞肉中代表性農藥的純化提供了簡單、快速和高效的方法。根據加標基質的標準樣品來看，雞肉中多種類、多殘留農藥測定的回收率和重現性是可以接受的。同時，雞肉中的雜質和基質效應對目標化合物的定量無干擾。由于研究中所選擇的農藥代表了各種不同類別和性質的農藥，因此，Bond Elut QuEChERS AOAC 萃取和分散 SPE 試劑盒是用于類似食品基質中其他農藥分析的選擇。
