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實驗室不同種類物品及培養物消毒滅菌方法
閱讀:806 發布時間:2020-12-111.無菌操作室滅菌
培養材料進行培養、觀察或更換培養液時,必須從各方面防止任何污染物進入培養液或容器,所以無菌操作室的滅菌是至關重要的。
由于無菌操作室的污染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子,因此長期停用后的無菌操作室應進行熏蒸滅菌。
熏蒸是用*+甲醛[(2ml甲醛+1g*)/m3]進行無菌室的滅菌。經常使用的無菌操作室,在每次使用前都應進行地面衛生清潔,并用紫外線燈照射30 min,進行空氣滅菌。對超凈工作臺,每次操作前用紫外燈照射30min,然后用70%~75%酒精擦拭。
2.培養液滅菌
培養液在制備過程中帶有各種雜菌,分裝后應立即滅菌,或在24小時內完成滅菌工序。目前常用過濾除菌法除去培養物操作液和培養液中的細菌。或對培養液中耐熱組分*行高壓蒸汽滅菌,然后在無菌室加入經過過濾除菌的不耐熱溶液,混勻后分裝備用。
使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時,將分裝好的培養液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內,增壓至0.35~0.4kg/cm2時排凈滅菌器內冷空氣,以便使蒸汽能到達各個消毒部位,保證消毒滅菌*。然后繼續加壓加熱,當壓力表讀數達到1.0~1.1kg/cm2為121oC,保持15~20 min即可。由于消毒滅菌效果取決于溫度而不是壓力,所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時間是必須的。
在121oC的蒸汽溫度下可以很快殺死各種細菌及高度耐熱的芽孢桿菌,因此許多培養液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0~1.1 kg/cm2、121oC。消毒滅菌時間與需要消毒滅菌的培養液量密切相關(表2-3),時間不足達不到滅菌效果,時間過長培養液內的一些化學物質遭到破壞,影響培養液成分。消毒滅菌結束后,關閉熱源,只有當滅菌器內壓力降為零時才能打開放氣閥,排除剩余蒸汽,取出培養液。不可在壓力較高時打開放氣閥,引起減壓沸騰,使容器中液體溢出。