分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。在使用過(guò)程中常常會(huì)出現(xiàn)測(cè)量誤差，這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?
1、復(fù)色光對(duì)比耳定律的偏離
比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計(jì)，也只能獲得近乎單色的光，無(wú)法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。
固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0.1nm；可見(jiàn)分光光度計(jì)帶寬6nm、snm，甚至十幾納米。
光譜帶寬應(yīng)該是越小越好，但是,隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以，選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí)，可近似認(rèn)為符合比耳定律。
2、雜散光的影響
雜散光是指進(jìn)人檢測(cè)器的處于待測(cè)波長(zhǎng)光譜帶寬范圍外的其他波長(zhǎng)組分，它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。
產(chǎn)生原因有:
分光光度計(jì)的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長(zhǎng)處，由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度、檢測(cè)器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。
雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測(cè)量誤差，實(shí)際工作中，在定量分析時(shí)，一般在吸收峰或其附近處測(cè)量樣品吸光度，如果在分析波長(zhǎng)處含有雜散光，這時(shí)樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過(guò)，使測(cè)量吸光度低于真實(shí)吸光度。
3、儀器噪聲對(duì)測(cè)t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo)，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測(cè)量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào)，掃描100T和0%T線，可觀察到分光光度計(jì)的噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會(huì)掩蓋較小的測(cè)量信號(hào)，一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。
4、波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確度
樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的，如果，波長(zhǎng)誤差很大，測(cè)出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。
國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%， B級(jí)土1.0%。
此外分光光度計(jì)的使用要避免以下幾種環(huán)境
1、不能在溫度太高和太低及濕度太高的環(huán)境下進(jìn)行使用。大家需要知道多的電子設(shè)備都是怕潮濕環(huán)境的，潮濕環(huán)境下使用不但設(shè)備精確度相對(duì)低，而且還易發(fā)生污染設(shè)備或者損壞設(shè)備的情況發(fā)生，包括使用環(huán)境溫度太高和太低都不行，通常紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)使用的合適溫度范圍在5攝氏度到35攝氏度之間。
2、不能在沒(méi)有穩(wěn)定性和不平穩(wěn)的環(huán)境下使用。該設(shè)備在整個(gè)使用中就怕的就是沒(méi)有好的穩(wěn)定性發(fā)生一些強(qiáng)烈震動(dòng)或者持續(xù)震動(dòng)情況，在這種情況下會(huì)導(dǎo)致設(shè)備損壞情況的發(fā)生，想要避免紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)要使用在一些有堅(jiān)固穩(wěn)定的工作臺(tái)上才好。
3、不能使用在強(qiáng)的照明環(huán)境下。這種設(shè)備使用在強(qiáng)的照明環(huán)境下，尤其使用在日光直射的環(huán)境下就會(huì)導(dǎo)致設(shè)備工作的不正常，建議設(shè)備需要在室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)且避免日光直射下才能正常的使用。
4、不能使用在電風(fēng)扇直吹的環(huán)境下。現(xiàn)在正值夏天環(huán)境溫度高，很多使用者就想到用電風(fēng)扇直吹設(shè)備的方法進(jìn)行使用，事實(shí)上這種使用會(huì)造成設(shè)備的受損，建議需要在裝有空調(diào)房屋內(nèi)使用才行。
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