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南京億迅生物科技有限公司
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DNS試劑(Ghose法)檢測原理
2024-4-26 閱讀(374)
DNS試劑(Ghose法)檢測原理
產品簡介：
Ghose法DNS試劑。又稱3,5-二硝基水楊酸法或簡稱DNS法,DNS試劑是植物總糖和還原糖檢測(硝基水楊酸法)的成分之一,定量檢測植物組織樣品中的總糖和還原糖的含量。
檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色產物的顏色深淺程度呈一定比例關系。在540nm處測定棕紅色物質的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關系。
【產品名稱】：DNS試劑(Ghose法)
【產品規格】：500ml
【儲存條件】：2-8℃
【有效期】：12個月
操作步驟(僅供參考)：
1、 還原糖的提取：
①稱取植物樣品0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約3ml勻漿，轉移至燒杯或三角瓶中，用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次，洗出液也轉移至該容器②50℃水浴30min，并不時攪拌，以便還原糖徹底浸出
③將沉淀和浸出液轉移至50ml離心管，4000g離心5min。
④留取上清液，向沉淀中加入20ml蒸餾水，混勻，再次4000g離心5min。
⑤留取上清液，將2次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。
2、 總糖的水解和提取：
①稱取植物樣品0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約3ml勻漿，轉移至燒杯或三角瓶中，用12ml蒸餾水沖洗研磨器2~3次，洗出液也轉移至該容器。
②向容器中加入10ml 6M鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸30min，并不時攪拌。
③取2滴滴加于載玻片上，滴加1滴顯色液，檢查水解是否完全，如已經水解完全則不顯示藍色。
④水解完畢后，冷卻至室溫，加入6M氫氧化鈉溶液，使溶液pH至7.4左右，用蒸餾水定容至100ml，混勻，4000g離心5min或過濾，獲得上清或濾液。
⑤取上清或濾液10ml，用蒸餾水定容至100ml，成稀釋10倍的總糖水解液(提取液)，取1ml總糖水解液，測定其還原糖的含量。
注意事項：
1、 該試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。
2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時，應小心操作，避免傷人。
3、 一般市售的濃鹽酸摩爾數約為11.6M，應稀釋至6M后使用。
4、 待測樣本如不能及時測定，應置于2~8℃保存，3天內穩定。
5、 如果樣品還原糖濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數。6、 總糖計算公式在測定干擾雜質很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用，×0.9是為了從測定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時所消耗的水量。
